Μόνο για in vitro διαγνωστική και επαγγελματική χρήση.

Κιτ ELISA για Αντισώματα IgG έναντι Ct (Ορός/Πλάσμα)

Αυτό το κιτ είναι για ποιοτική ανίχνευση αντισωμάτων IgG έναντι Chlamydia trachomatis (Ct) σε ανθρώπινο ορό/πλάσμα. Το κιτ είναι κατάλληλο για κλινικό έλεγχο και διάγνωση λοίμωξης από Ct σε ορό/πλάσμα.

Αντιγόνο Ct είναι προσροφημένο σε στερεά φάση στην πολυστυρενική μικροπλάκα αντίδρασης. Εάν υπάρχει αντίσωμα IgG έναντι Ct στο δείγμα δοκιμής, αυτό συνδέεται με το αντιγόνο Ct επικαλυμμένο στην μικροπλάκα, σχηματίζει σύμπλοκο αντιγόνου-αντισωμάτου, και στη συνέχεια συνδέεται με το ενζυμικά σημασμένο αντί-αντίσωμα και σχηματίζει σύμπλοκο αντιγόνου-αντισωμάτου-αντισωμάτου στην επιφάνεια της μικροπλάκας, και εμφανίζει μπλε χρώμα στο αντίστοιχο πηγάδι μέσω της δράσης του υποστρώματος. Επομένως, μπορεί να ανιχνεύσει ειδικά τα IgG έναντι Ct σε ανθρώπινο ορό/πλάσμα.

1. Εξισορροπήστε όλα τα αντιδραστήρια σε θερμοκρασία δωματίου για 15 λεπτά πριν τη χρήση.

2. Αραιώστε το διάλυμα πλύσης σε αναλογία 1:40 με απιονισμένο νερό πριν τη χρήση.

3. Προσθέστε 100μL Διαλύματος Δείγματος στα αντίστοιχα πηγάδια (Μην προσθέτετε στο κενό πηγάδι, στα πηγάδια αρνητικού ελέγχου και στο πηγάδι θετικού ελέγχου). Το δείγμα πρέπει να αντιστοιχεί στον αριθμό των μικροπλακών, κάθε πλάκα πρέπει να παρέχεται με 2 πηγάδια αρνητικού ελέγχου, 1 πηγάδι θετικού ελέγχου και 1 πηγάδι κεντρικού ελέγχου. Προσθέστε 5μL δείγματος στα αντίστοιχα πηγάδια, αναμίξτε καλά χρησιμοποιώντας την πιπέτα, προσθέστε 50μL αρνητικού ελέγχου και θετικού ελέγχου στα πηγάδια αρνητικού ελέγχου και στο πηγάδι θετικού ελέγχου (Μην προσθέτετε στο κενό πηγάδι).

Σημείωση: Χρησιμοποιήστε ξεχωριστή άκρη πιπέτας μιας χρήσης για κάθε δείγμα, αρνητικό και θετικό έλεγχο για να αποφύγετε διασταυρούμενη μόλυνση.

4. Ανακινήστε απαλά για ανάμιξη για 30 δευτερόλεπτα. Επωάστε στους 37°C για 20 λεπτά με την μεμβράνη στεγανοποίησης της πλάκας να σφραγίζει την πλάκα.

5. Στο τέλος της επώασης, αφαιρέστε και απορρίψτε το κάλυμμα της πλάκας. Αφαιρέστε, προσθέστε διάλυμα πλύσης σε κάθε πηγάδι για 20 δευτερόλεπτα. Επαναλάβετε 5 φορές. Μετά τον τελευταίο κύκλο πλύσης, αναποδογυρίστε την πλάκα πάνω σε απορροφητικό χαρτί ή καθαρή πετσέτα και χτυπήστε την για να αφαιρέσετε τυχόν υπολείμματα.

6. Προσθέστε αντίστοιχα 50μL Συζεύγματος Ενζύμου (Μην προσθέτετε στο κενό πηγάδι)

7. Επωάστε στους 37°C για 20 λεπτά με την μεμβράνη στεγανοποίησης της πλάκας να σφραγίζει την πλάκα. Επαναλάβετε το βήμα πλύσης για 5 φορές όπως στο βήμα 5.

8. Προσθέστε 50μL Υποστρώματος Α και 50μL Υποστρώματος Β (Μην προσθέτετε στο κενό πηγάδι). Επωάστε στους 37°C για 10 λεπτά με την μεμβράνη στεγανοποίησης της πλάκας να σφραγίζει την πλάκα.

9. Προσθέστε 50μL Διαλύματος Διακοπής σε κάθε πηγάδι (Μην προσθέτετε στο κενό πηγάδι). Αναμίξτε απαλά με ανακίνηση, διαβάστε την απορρόφηση εντός 10 λεπτών μετά τη διακοπή της αντίδρασης. Βαθμονομήστε τον αναγνώστη μικροπλακών με το κενό πηγάδι και διαβάστε την απορρόφηση στα 450nm. Εάν χρησιμοποιείται όργανο διπλού φίλτρου, ρυθμίστε το μήκος κύματος αναφοράς στα 630nm. Δεν επιτρέπεται η ρύθμιση κενού πηγαδιού εάν χρησιμοποιείται διπλό μήκος κύματος για ανίχνευση. Υπολογίστε την τιμή κατωφλίου και αξιολογήστε τα αποτελέσματα.

Χρονομέτρηση: Διαβάστε την οπτική πυκνότητα (OD) του δείγματος στα 450nm με έναν αναγνώστη μικροπλακών.

Η μέση τιμή OD του αρνητικού ελέγχου ≤ 0.1 και η μέση τιμή OD του θετικού ελέγχου ≥ 0.8, η δοκιμή είναι έγκυρη, αλλιώς η δοκιμή είναι άκυρη.

Θετικά Αποτελέσματα: Τιμή OD δείγματος ≥ C.O.