Εξάρτηση 96 PC δοκιμής ορμονών λουρίδων δοκιμής της Elisa LH ISO13485 Luteinizing

Ορμόνη Luteinizing εξαρτήσεων LH Elisa

1. Προοριζόμενη χρήση

Immunoassay για το τεχνητό ποσοτικό προσδιορισμό η ορμόνη στον ανθρώπινο ορό.

2. Περίληψη

• Το LH (luteinizing ορμόνη), μαζί με FSH (παρακινητική ορμόνη θυλακίου), ανήκει στην οικογένεια γοναδοτροπινών. Το LH και FSH ρυθμίζουν και υποκινούν την αύξηση και τη λειτουργία gonads (ωοθήκες και testes) συνεργικά. Όπως FSH, TSH και hCG, το LH είναι glycoprotein που αποτελείται από δύο υπομονάδες (α- και β-αλυσίδες). (1, 2, 3) αυτό το proteohormone, που αποτελείται από 121 αμινοξέα και τρεις αλυσίδες ζάχαρης, έχει ένα μοριακό βάρος 29500 daltons. Στις γυναίκες, οι γοναδοτροπίνες ενεργούν μέσα στο ρυθμίζοντας κύκλωμα υποθάλαμος-βλεννογόνος-ωοθηκών για να ελέγξουν τον εμμηνορροϊκό κύκλο.
• Το LH και FSH απελευθερώνονται στους σφυγμούς από τα gonadotropic κύτταρα προηγούμενων του βλεννογόνου και του περάσματος μέσω της κυκλοφορίας του αίματος στις ωοθήκες. Εδώ οι γοναδοτροπίνες υποκινούν την αύξηση και την ωρίμανση του θυλακίου και ως εκ τούτου η βιοσύνθεση των οιστρογόνων και των προγεστερονών. Οι υψηλότερες LH-συγκεντρώσεις εμφανίζονται κατά τη διάρκεια της αιχμής μέσος-κύκλων και προκαλούν την ωογένεση και το σχηματισμό του luteum σωμάτων, το κύριο προϊόν έκκρισης του οποίου είναι προγεστερόνη. Στα κύτταρα Leydig testes, το LH υποκινεί την παραγωγή της τεστοστερόνης. Ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης LH χρησιμοποιείται στη διευκρίνιση των δυσλειτουργιών μέσα στο σύστημα υποθάλαμος-βλεννογόνος-gonads. Ο προσδιορισμός του LH από κοινού με FSH χρησιμοποιείται για τις ακόλουθες ενδείξεις: συγγενείς ασθένειες με τις παρεκκλίσεις χρωμοσωμάτων (π.χ. σύνδρομο του Turner), τις polycystic ωοθήκες (PCO), που διευκρινίζει τις αιτίες της αμηνόρροιας, του menopausal συνδρόμου, και της πιθανής ανεπάρκειας κυττάρων Leydig. (1, 4, 5)

3. Αρχή δοκιμής

Αρχή σάντουιτς. Συνολική διάρκεια της δοκιμής: 80 λεπτά.

• Το δείγμα, το αντι-LH που ντύνονται microwells και επονομαζόμενο το ένζυμο αντι-LH συνδυάζονται.

• Κατά τη διάρκεια της επώασης, το LH παρουσιάζει στο δείγμα επιτρέπεται για να αντιδράσει

ταυτόχρονα με τα δύο αντισώματα, με συνέπεια τα μόρια LH που είναι

στριμωγμένος μεταξύ της στερεάς φάσης και των ένζυμο-συνδεμένων αντισωμάτων.

• Μετά από την πλύση, ένα συγκρότημα παράγεται μεταξύ της στερεάς φάσης, του LH μέσα στο δείγμα και των ένζυμο-συνδεμένων αντισωμάτων από τις ανοσολογικές αντιδράσεις.

• Η λύση υποστρωμάτων προστίθεται έπειτα και καταλύεται από αυτόν τον σύνθετο, με συνέπεια μια χρωμογενή αντίδραση. Η προκύπτουσα χρωμογενής αντίδραση μετριέται ως απορροφητικότητα.

• Η απορροφητικότητα είναι ανάλογη προς το ποσό του LH στο δείγμα.

Αντιδραστήρια

Υλικά παρεχόμενα

• Ντυμένο Microplate, 8 λουρίδες της X12, 96 φρεάτια, που καλύπτονται προηγουμένως με το ποντίκι μονοκλονικό

Αντι-LH.

• Διακριβωτές, 6 φιαλίδια, 1 μιλ. κάθε, έτοιμο να χρησιμοποιήσει Συγκεντρώσεις: 0 (Α), 5 (Β), 20 (Γ), 50 (Δ), 100 (Ε) ΚΑΙ 200 MIU/ML (Φ).

• Ενζυμική κλίση, 1 φιαλίδιο, 11 μιλ. του επονομαζόμενου ποντικιού HRP (peroxidase χρένου) μονοκλονικό αντι-LH στον απομονωτή tris-ΝαCl που περιέχει BSA (λευκωματίνη βοοειδών ορών). Περιέχει 0,1% συντηρητικό ProClin300.

• Υπόστρωμα, 1 φιαλίδιο, 11ml, έτοιμο να χρησιμοποιήσει, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Λύση στάσεων, 1 φιαλίδιο, 6,0 μιλ. 1 θειικού οξέος mol/L.

• Συμπύκνωση λύσης πλυσίματος, 1 φιαλίδιο, 25 μιλ. (40X που συγκεντρώνεται), PBS-Tween

λύση πλυσίματος.

• IFU, 1 αντίγραφο.

• Καπάκι πιάτων: 1 κομμάτι.

Υλικά που απαιτούνται (αλλά παρεχόμενος)

• Αναγνώστης Microplate με την απορροφητική ικανότητα μήκους κύματος 450nm και 620nm.

• Πλυντήριο Microplate.

• Επωαστήρας

4. Διαδικασία δοκιμής

• Η χρήση μόνο ο αριθμός φρεατίων απαίτησε και σχηματοποιεί τα φρεάτια των microplates για

κάθε διακριβωτής και δείγμα που δοκιμάζονται.

• Προσθέστε 25 μL των διακριβωτών ή των δειγμάτων σε κάθε ένα καλά.

• Προσθέστε 100 μL της ενζυμικής κλίσης σε κάθε μια καλά.

• Τινάξτε το microplate ήπια για 30 δευτερόλεπτα που αναμιγνύουν.

• Καλύψτε το πιάτο με ένα καπάκι πιάτων και επωάστε σε 37 °C για 60 λεπτά.

• Απορρίψτε το περιεχόμενο του πιάτου μικροϋπολογιστών από τη μετάγγιση ή τη φιλοδοξία. Εάν

μεταγγίζοντας, τρυπήστε και λεκιάστε το πιάτο ξηρό με το απορροφητικό έγγραφο.

• Προσθέστε 350 μL της λύσης πλυσίματος, μεταγγίστε (βρύση και λεκές) ή απορροφήστε. Επαναλάβετε 4 πρόσθετες φορές για συνολικά 5 πλυσίματα. Ένα αυτοματοποιημένο microplate πλυντήριο λουρίδων μπορεί να χρησιμοποιηθεί. Στο τέλος της πλύσης, αναστρέψτε το πιάτο και τρυπήστε έξω οποιαδήποτε υπόλοιπη λύση πλυσίματος επάνω στο απορροφητικό έγγραφο.

• Προσθέστε 100 μL του υποστρώματος σε κάθε ένα καλά.

• Επωάστε στην περιβαλλοντική θερμοκρασία (18-25℃) στο σκοτάδι για την αντίδραση για 20 λεπτά. Μην τινάξτε το πιάτο μετά από την προσθήκη υποκράτους.

• Προσθέστε 50 μl της λύσης στάσεων σε κάθε μια καλά.

• Κούνημα για 15-20 δευτερόλεπτα για να αναμίξουν το υγρό μέσα στα φρεάτια. Είναι σημαντικό

εξασφαλίστε ότι οι μπλε αλλαγές χρώματος σε κίτρινο εντελώς.

• Διαβάστε την απορροφητικότητα κάθε μια καλά σε 450 NM (που χρησιμοποιούν 620 έως 630 NM ως

μήκος κύματος αναφοράς για να ελαχιστοποιήσει καλά τις ατέλειες) σε έναν αναγνώστη πιάτων μικροϋπολογιστών.