2. Αραιώστε το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης με ρυθμό αραίωσης 1:40 με απεσταγμένο νερό πριν από τη χρήση.
3. Προσθέστε 100μL αραιωτικού δείγματος στην αντίστοιχη κοιλότητα (Μην προσθέσετε στο κενό φρεάτιο, αρνητικό
φρεάτια ελέγχου και φρεάτιο θετικού μάρτυρα.) Το δείγμα πρέπει να αντιστοιχεί στον αριθμό των μικρο
πλάκα, κάθε πλάκα πρέπει να διαθέτει αρνητικό μάρτυρα 2 φρεάτια, θετικό μάρτυρα 1 φρεάτιο και κενό
έλεγχος 1 φρεάτιο. Προσθέστε 5μL δείγματος στο αντίστοιχο φρεάτιο, ανακατέψτε καλά χρησιμοποιώντας την πιπέτα, προσθέστε
50μL αρνητικός μάρτυρας και θετικός μάρτυρας σε φρεάτια αρνητικού μάρτυρα και φρεάτιο θετικού μάρτυρα (Όχι
προσθέστε στο κενό πηγάδι).
Σημείωση: Χρησιμοποιήστε ξεχωριστό άκρο πιπέτας απόρριψης για κάθε δείγμα, αρνητικό και θετικό μάρτυρα για να
αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση.
4. Ανακινήστε απαλά να αναμειχθεί για 30 δευτερόλεπτα. Επωάστε στους 37°C για 20 λεπτά με τη μεμβράνη της πλάκας σφράγισης
σφράγιση της πλάκας.
5. Στο τέλος της επώασης, αφαιρέστε και πετάξτε το κάλυμμα της πλάκας. Βγάλτε, προσθέστε ρυθμιστικό πλύσης σε
κάθε φρεάτιο για 20 δευτερόλεπτα. Επαναλάβετε 5 φορές. Μετά τον τελευταίο κύκλο πλύσης, αναποδογυρίστε το πιάτο
στυπόχαρτο ή καθαρή πετσέτα και χτυπήστε το για να αφαιρέσετε τυχόν υπολείμματα.
6. Αντίστοιχα προσθήκη ενζυμικού συζεύγματος 50µL (μην προσθέτετε στο κενό πηγάδι)
7. Επωάστε στους 37°C για 20 λεπτά με τη μεμβράνη της πλάκας σφράγισης να σφραγίζει την πλάκα. Επαναλάβετε το
βήμα πλύσης για 5 φορές όπως στο βήμα 5.
8. Προσθέστε Υπόστρωμα Α 50μL και Υπόστρωμα Β 50μL (Μην προσθέσετε στο κενό πηγάδι). Επώαση στους 37 ℃ για
10 λεπτά με τη μεμβράνη της πλάκας στεγανοποίησης να σφραγίζει την πλάκα.
9. Προσθέστε 50μL Stop Solution σε κάθε φρεάτιο (Μην προσθέσετε στο κενό πηγάδι). Ανακατεύουμε απαλά ανακινώντας, διαβάστε το
απορρόφηση εντός 10 λεπτών μετά τη διακοπή της αντίδρασης. Βαθμονόμηση της συσκευής ανάγνωσης πιάτων με το Blank
καλά και διαβάστε την απορρόφηση στα 450 nm. Εάν χρησιμοποιείται όργανο διπλού φίλτρου, ορίστε την αναφορά
μήκος κύματος στα 630 nm. Δεν επιτρέπεται η ρύθμιση χωρίς κενό φρεάτιο εάν χρησιμοποιείται διπλό μήκος κύματος για ανίχνευση. Υπολογίστε το
Αποκοπή τιμής και αξιολόγηση των αποτελεσμάτων.
Χρονομετρία: Διαβάστε την οπτική πυκνότητα (OD) του δείγματος στα 450 nm με συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας.
Η μέση τιμή αρνητικού ελέγχου OD ≤ 0,1 και η μέση τιμή θετικού μάρτυρα OD ≥ 0,8, η δοκιμή είναι έγκυρη,
διαφορετικά το τεστ είναι άκυρο.
Τιμή αποκοπής (CO) = Η μέση τιμή OD του αρνητικού ελέγχου x 3 (Υπολογίζεται με 0,10 όταν ο μέσος
Η τιμή OD αρνητικού μάρτυρα είναι < 0,10, που υπολογίζεται με την πραγματική τιμή όταν η μέση αρνητική τιμή ελέγχου OD
η τιμή είναι > 0,10)
Θετικά αποτελέσματα: Δείγμα τιμής OD ≥ CO
Το μήνυμά σας πρέπει να αποτελείται από 20-3.000 χαρακτήρες!
Greek
