ΚΙΤ ΕΛΙΣΑ ΔΟΚΙΜΗΣ AHM

1. Αρχή

Το AMH ELISA είναι μια ποσοτική ανοσοδοκιμασία που μετρά την Αντι-Μυλλέριος Ορμόνη (AMH) στον ορό ή το πλάσμα του ανθρώπου. Χρησιμοποιεί μια μορφή sandwich ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) με αντισώματα ειδικά για την AMH, επιτρέποντας την ακριβή ανίχνευση βιοδεικτών ωοθηκικής εφεδρείας.

2. Προβλεπόμενη Χρήση

• Αξιολόγηση ωοθηκικής εφεδρείας (γονιμότητα στις γυναίκες).

• Διάγνωση συνδρόμου πολυκυστικών ωοθηκών (PCOS).

• Παρακολούθηση υποβοηθούμενης αναπαραγωγικής τεχνολογίας (ART) (π.χ., IVF).

• Παιδιατρικές μελέτες και μελέτες ορμονών που σχετίζονται με την εμμηνόπαυση.

3. Βασικά Χαρακτηριστικά

• Υψηλή ευαισθησία: Ανιχνεύει χαμηλά επίπεδα AMH (τυπικό εύρος: 0.01–24 ng/mL).

• Υψηλή ειδικότητα: Ελάχιστη διασταυρούμενη δραστικότητα με σχετικές ορμόνες (π.χ., ινχιμπίνη Β).

• Μορφή: Μικροπλάκα 96 φρεατίων (ανταγωνιστική ή sandwich ELISA, ανάλογα με το κιτ).

• Τύποι δειγμάτων: Ορός (χρυσό πρότυπο) ή πλάσμα (EDTA/ηπαρίνη).

• Όγκος δείγματος: 20–50 µL ανά δοκιμή.

4. Διαδικασία δοκιμασίας

1. Προετοιμασία δείγματος: Φυγοκεντρήστε δείγματα αίματος (10 λεπτά στα 1000–3000 × *g*).

2. Επώαση:

   • Προσθέστε δείγματα/πρότυπα σε φρεάτια επικαλυμμένα με αντισώματα.

   • Επώαση (1–2 ώρες, RT ή 37°C).

3. Πλύσιμο: Αφαιρέστε το μη δεσμευμένο υλικό.

4. Ανίχνευση: Προσθέστε συζευγμένο με ένζυμο αντίσωμα (π.χ., HRP) → υπόστρωμα (TMB).

5. Διάλυμα διακοπής: Όξινο διάλυμα σταματά την αντίδραση (αλλαγή χρώματος).

6. Ανάγνωση: Μετρήστε την απορρόφηση στα 450 nm (αναφορά: 620–650 nm).

5. Μετρικές απόδοσης

• Ακρίβεια: Ρυθμός ανάκτησης 90–110% (σε σχέση με τα πρότυπα WHO/NIBSC).

• Ακρίβεια: Ενδο-δοκιμασίας CV <10%, δια-δοκιμασίας CV <12%.

• Γραμμικότητα: Ανάκτηση αραίωσης 85–115%.

• Όριο ανίχνευσης (LOD): 0.01–0.1 ng/mL (εξαρτάται από το κιτ).

6. Ερμηνεία

• Φυσιολογικό εύρος:

  • Γυναίκες στην προεμμηνόπαυση: 1.0–4.0 ng/mL.

  • Χαμηλή ωοθηκική εφεδρεία: <1.0 ng/mL.

  • PCOS: Συχνά >4.0 ng/mL.

• Ειδικές τιμές αποκοπής ανά φύλο/ηλικία πρέπει να επικυρώνονται ανά εργαστήριο.

7. Πλεονεκτήματα

• Σταθερότητα: Η AMH είναι ισχυρή (το δείγμα είναι σταθερό για 48–72 ώρες στους 2–8°C; μακροπρόθεσμα στους –20°C).

• Συμβατό με αυτοματισμό: Προσαρμόσιμο σε πλατφόρμες όπως DS2 (Dynex) ή ELx808 (BioTek).

8. Περιορισμοί

• Δεν είναι τυποποιημένο σε όλα τα κιτ: Τα αποτελέσματα ενδέχεται να διαφέρουν μεταξύ των κατασκευαστών.

• Παρεμβολές: Αιμόλυση, λιπαιμία ή επαναλαμβανόμενοι κύκλοι κατάψυξης-απόψυξης.

9. Παραδείγματα εμπορικών κιτ

• "AMH Gen II ELISA" (Ansh Labs/Abbott).

• "picoAMH ELISA" (Ansh Labs, εξαιρετικά ευαίσθητο).

• "Human AMH ELISA Kit" (R&D Systems, Cat. No. DSL-10-14400).