ΚΙΤ δοκιμής ELISA βιταμίνης D 25-OH

Σκοπός

Κίτ ανίχνευσης βιταμίνης D 25-OH (Enzyme- Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA). Χρησιμοποιείται σε ποσοτικές δοκιμές βιταμίνης D στον ανθρώπινο ορό.

Σύνοψη και Κλινική Σημασία

 Η βιταμίνη D είναι ένα λιποδιαλυτή πρόδρομο ορμόνης που παράγεται κυρίως από την έκθεση του δέρματος στο ηλιακό φως.Το σώμα μας μπορεί να συνθέσει μόνο βιταμίνη D3Η βιταμίνη D2 μπορεί να λαμβάνεται μέσω εμπλουτισμένων τροφίμων ή συμπληρωμάτων.οι βιταμίνες D3 και D2 συνδέονται με την πρωτεΐνη δέσμευσης βιταμίνης D (VDBP) στο πλάσμα και μεταφέρονται στο ήπαρ για να γίνουν 25- υδροξυβιταμίνη D (25- OH βιταμίνη D)Δεδομένου ότι η βιταμίνη D 25-OH είναι η κύρια μορφή αποθήκευσης, η συγκέντρωσή της στο αίμα μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την εκτίμηση της συνολικής κατάστασης της βιταμίνης D. Περισσότερο από το 95% της μετρήσιμης βιταμίνης D 25-OH στον ορό είναι βιταμίνη D3,Η βιταμίνη D2 είναι απαραίτητη για την υγεία των οστών. Στα παιδιά, η σοβαρή ανεπάρκεια μπορεί να οδηγήσει σε ραχίκη.Σε ηλικιωμένουςΕπιπλέον, οι χαμηλές συγκεντρώσεις βιταμίνης D 25- OH συνδέονται με χαμηλή οστική πυκνότητα.Η ανεπάρκεια βιταμίνης D συνδέεται επίσης με το διαβήτηΤα δύο συμπληρώματα διατροφής με βιταμίνη D που διατίθενται σήμερα στην αγορά (βιταμίνη D2 και βιταμίνη D3) μετατρέπονται σε βιταμίνη D 25-OH στο ήπαρ.Το άθροισμα των συγκεντρώσεων της βιταμίνης D2 25-OH και της βιταμίνης D3 25-OH στον ορό ή στο πλάσμα αναφέρεται ως "συνολική βιταμίνη D 25-OH"Σε κλινικά περιβάλλοντα, η ακριβής παρακολούθηση των συνολικών επιπέδων βιταμίνης D 25-OH είναι κρίσιμη. Vitamin D-deficient patients who take daily vitamin D supplements should have their serum or plasma vitamin D levels monitored regularly to achieve optimal levels and prevent their 25-OH vitamin D concentrations from reaching levels that are considered toxicΗ συνολική εξέταση βιταμίνης D χρησιμοποιεί ειδικά αντισώματα για την ανίχνευση των 25-υδροξυβιταμινών D3 και D2.Η δοκιμή έχει σχεδιαστεί για την ποσοτική μέτρηση της συνολικής βιταμίνης D 25-OH στον ανθρώπινο ορό και στο πλάσμα για να βοηθήσει στην αξιολόγηση της βιταμίνηςD επαρκής.

ΠΡΙΝΣΠΟΙΗ

Το τεστ ποσοτικής δοκιμής βιταμίνης D 25-OH βασίζεται σε δοκιμή ανοσοσυμπίεσης στερεής φάσης που συνδέεται με ένζυμα.Το σύστημα ανάλυσης χρησιμοποιεί ένα αντισώμα για ακινητοποίηση στερεής φάσης (μικροτιτρικά πηγάδια) και ένα άλλο μονοκλωνικό αντισώμα στα διαλύματα.Το τρίτο αντισώμα που αναγνωρίζει το δεύτερο αντισώμα συνδυασμένο με ένα ένζυμο (περοξειδάση χοιρινού ρέδου).τα πρότυπα και το δείγμα δοκιμής (όρό) προστίθενται στα μικροτιτρικά πηγάδια που έχουν επικαλυφθεί με αντισώματα βιταμίνης D 25-OH, επώαση 30 λεπτά μαζί με το δεύτερο αντισώμα. Μετά το πλύσιμο, προστίθεται το τρίτο αντισώμα με σήμανση υπεροξειδάσης κρέατος. Εάν η ανθρώπινη βιταμίνη D 25-OH βρίσκεται στο δείγμα,θα συνδυαστεί με το αντισώμα στο πηγάδι και το συνδυασμό των ενζύμων με αποτέλεσμα να σχηματιστούν σάντουιτς μεταξύ της στερεής φάσης και των ενζυματικών αντισωμάτων.τα πηγάδια πλένονται με νερό για να αφαιρεθούν τα μη συνδεδεμένα αντισώματα με την ετικέτα. Ένα διάλυμα TMB προστίθεται και εκκολάπτεται για 20 λεπτά, με αποτέλεσμα την ανάπτυξη ενός μπλε χρώματος. Η ανάπτυξη χρώματος σταματά με την προσθήκη του Stop Solution.Το χρώμα αλλάζει σε κίτρινο και μετριέται φασματοφωτομετρικά στα 450 nmΟι συγκεντρώσεις της βιταμίνης D είναι άμεσα ανάλογες με την ένταση του χρώματος του δείγματος δοκιμής.

ΕΠΙΤΡΟΠΟΙ

1Τα δείγματα και τα αντιδραστήρια πρέπει να φτάνουν σε θερμοκρασία δωματίου (~ 25°C) και να αναμιγνύονται προσεκτικά με απαλή αντιστροφή πριν από τη χρήση.

2Προετοιμάστε το Wash Buffer με αραίωση του Wash Concentrate 20 φορές με αποιονισμένο νερό.

Προφυλάξεις για τους χρήστες

1Ο χειρισμός θα πρέπει να αποκλείει οποιαδήποτε πίπετση από το στόμα.

2.Μην αναμειγνύετε υλικά από διαφορετικές κυριότερες παρτίδες.Μην χρησιμοποιείτε τα συστατικά του κιτ μετά την ημερομηνία λήξης.

3Όλα τα υλικά πρέπει να φθάνουν σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.