ΚΙΤ δοκιμής ELISA βιταμίνης D 25-OH

Σκοπός

Κίτ ανίχνευσης βιταμίνης D 25-OH (Enzyme- Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA). Χρησιμοποιείται σε ποσοτικές δοκιμές βιταμίνης D στον ανθρώπινο ορό.

Σύνοψη και Κλινική Σημασία

Η βιταμίνη D είναι ένα λιποδιαλυτή πρόδρομο ορμόνης που παράγεται κυρίως στο δέρμα από την έκθεση στο ηλιακό φως.Το σώμα μας μπορεί να συνθέσει μόνο βιταμίνη D3Η βιταμίνη D2 λαμβάνεται με εμπλουτισμένη τροφή ή με συμπληρώματα.η βιταμίνη D3 και η βιταμίνη D2 συνδέονται με την πρωτεΐνη δέσμευσης βιταμίνης D (VDBP) στο πλάσμα και μεταφέρονται στο ήπαρ για να γίνουν βιταμίνη D 25- υδροξυ (25- OH βιταμίνη D)Η βιταμίνη D περιέχει περισσότερο από 95% βιταμίνης D, μετρήσιμη στον ορό, ενώ η βιταμίνη D περιέχει περισσότερο από 50% βιταμίνης D.Η βιταμίνη D3 είναι 25-OH ενώ η βιταμίνη D2 φτάνει σε μετρήσιμα επίπεδα μόνο σε ασθενείς που λαμβάνουν συμπληρώματα βιταμίνης D2.Η βιταμίνη D είναι απαραίτητη για την υγεία των οστών. Στα παιδιά, η σοβαρή ανεπάρκεια οδηγεί σε ραχίτιδα.,Η ανεπάρκεια συνδέεται επίσης με διαβήτη, καρκίνο, καρδιαγγειακές παθήσεις και αυτοάνοσες ασθένειες.Και τα δύο συμπληρώματα διατροφής με βιταμίνη D που διατίθενται σήμερα στην αγορά (βιταμίνη D2 και βιταμίνη D3) μετατρέπονται σε βιταμίνη D 25-OH στο ήπαρΤο άθροισμα των συγκεντρώσεων της βιταμίνης D2-OH και της βιταμίνης D3-OH στο ορό ή στο πλάσμα ονομάζεται συνολική βιταμίνη D2-OH.Η ακριβής παρακολούθηση του συνολικού επιπέδου βιταμίνης D 25- OH είναι κρίσιμη σε κλινικά περιβάλλοντα.. Vitamin D deficient patients who are prescribed a daily Vitamin D supplement should regularly monitor their serum or plasma Vitamin D levels in order to reach an optimal level and prevent their 25-OH Vitamin D concentrations from reaching excessive levels that are considered toxicΗ συνολική εξέταση βιταμίνης D χρησιμοποιεί ειδικά αντισώματα για την ανίχνευση τόσο της 25-υδροξυβιταμίνης D3 όσο και της D2.Η δοκιμή αυτή προορίζεται για τον ποσοτικό προσδιορισμό της συνολικής βιταμίνης D 25-OH στον ανθρώπινο ορό και στο πλάσμα., ως βοηθητικό μέσο για την εκτίμηση της επάρκειας της βιταμίνης D.

ΠΡΙΝΣΠΟΙΗ

Το τεστ ποσοτικής δοκιμής βιταμίνης D 25-OH βασίζεται σε δοκιμή ανοσοσυμπίεσης στερεής φάσης που συνδέεται με ένζυμα.Το σύστημα ανάλυσης χρησιμοποιεί ένα αντισώμα για ακινητοποίηση στερεής φάσης (μικροτιτρικά πηγάδια) και ένα άλλο μονοκλωνικό αντισώμα στα διαλύματα.Το τρίτο αντισώμα που αναγνωρίζει το δεύτερο αντισώμα συνδυασμένο με ένα ένζυμο (περοξειδάση χοιρινού ρέδου).τα πρότυπα και το δείγμα δοκιμής (όρό) προστίθενται στα μικροτιτρικά πηγάδια που έχουν επικαλυφθεί με αντισώματα βιταμίνης D 25-OH, επώαση 30 λεπτά μαζί με το δεύτερο αντισώμα. Μετά το πλύσιμο, προστίθεται το τρίτο αντισώμα με σήμανση με υπεροξειδάση χοιρινού ραδιού (συμπυκνωμένο). Εάν η ανθρώπινη βιταμίνη D 25-OH είναι παρούσα στο δείγμα,θα συνδυαστεί με το αντισώμα στο πηγάδι και το συνδυασμό των ενζύμων με αποτέλεσμα να σχηματιστούν σάντουιτς μεταξύ της στερεής φάσης και των ενζυματικών αντισωμάτων.τα πηγάδια πλένονται με νερό για να αφαιρεθούν τα μη συνδεδεμένα αντισώματα με την ετικέτα. Ένα διάλυμα TMB προστίθεται και εκκολάπτεται για 20 λεπτά, με αποτέλεσμα την ανάπτυξη ενός μπλε χρώματος. Η ανάπτυξη χρώματος σταματά με την προσθήκη του Stop Solution.Το χρώμα αλλάζει σε κίτρινο και μετριέται φασματοφωτομετρικά στα 450 nmΟι συγκεντρώσεις της βιταμίνης D είναι άμεσα ανάλογες με την ένταση του χρώματος του δείγματος δοκιμής.

Παροχή αντιδραστηρίων

Επιχρισμένη μικροπίνακαΜονοκλωνική πλάκα με επικαλυμμένο αντισώμα βιταμίνης D και σφραγισμένη σε αλουμινένια σακούλα.Αφαιρέστε τις λωρίδες από την επανακλείδωτη σακούλα με αποξηρατικό για να τις προστατεύσετε από την υγρασία μετά το άνοιγμα.. Αποθηκεύεται σε θερμοκρασία 2 έως 8°C μέχρι την ημερομηνία λήξης.

Συνδυασμός HRP:1 φιαλίδιο 22 ml, έτοιμο για χρήση.

Κλιμακωτής:6 φιαλίδια 0, 2 ml με ετικέτα S0 έως S5 και συγκέντρωση PRL 0, 10, 20, 50,100Φυλάσσεται σε θερμοκρασία 2 έως 8°C μέχρι την ημερομηνία λήξης.

Έλεγχος:2 φιαλίδια 0, 2 ml.

Βιταμίνη D Διάλυμα δείγματος:1 φιαλίδιο 22 ml, έτοιμο για χρήση.

Υπόστρωμα TMB:1 φιαλίδιο 12 ml, έτοιμο για χρήση.

Σταματήστε τη λύση:1 φιαλίδιο 12 ml, έτοιμο για χρήση.

Κωφίδα πλύσης:1 φιαλίδιο 15 ml, Συγκεντρώστε 50 φορές, αραιώνοντας με αποιονισμένο νερό πριν από τη δοκιμή.

Σφραγιστή πλάκας:Δύο κομμάτια.

Πλαστικές σακούλες επανακλείδωσης:Ένα σετ.

Οδηγία χρήσης:1 αντίγραφο.

ΕΠΙΤΡΟΠΟΙ

1Τα δείγματα και τα αντιδραστήρια πρέπει να φτάνουν σε θερμοκρασία δωματίου (~ 25°C) και να αναμιγνύονται καλά με απαλή αντιστροφή πριν από τη χρήση.

2Προετοιμάστε το Wash Buffer με αραίωση του Wash Concentrate 20 φορές με αποιονισμένο νερό.

Προφυλάξεις για τους χρήστες

1Ο χειρισμός θα πρέπει να αποκλείει οποιαδήποτε πίπετση από το στόμα.

2.Μην αναμειγνύετε υλικά από διαφορετικές κυριότερες παρτίδες.Μην χρησιμοποιείτε τα συστατικά του κιτ μετά την ημερομηνία λήξης.

3Όλα τα υλικά πρέπει να φθάνουν σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.