Δοκιμαστικό κιτ ELISA για αντισώματα (IgE)

Σκοπός

  Το εν λόγω κιτ είναι ποσοτική ανίχνευση του συνολικού αντισώματος IgE (IgE) στον ανθρώπινο ορό/πλασμα in vitro.Συνολική εξέταση IgE μπορεί επίσης να συνιστάται για ασθενείς με υποψία παρασιτικής νόσου..

ΠΡΙΝΣΠΟΙΗ ΤΗΣ ΔΙΚΑΣΗΣ

  Η άμεση υπερευαισθησία (αλλεργίες τύπου Ι) μεσολαβεί από ειδικό IgE.η αύξηση του ειδικού IgE στους ασθενείς συνοδεύεται από αύξηση του συνολικού τιτρού IgEΣε αυτή την περίπτωση, ο τίτλος μπορεί να αυξηθεί έως και 1.000 φορές. Γενικά, οι διεθνείς μονάδες ανά χιλιοστόλιτρο (IU/mL) ορίζονται ως εξής: 1 IU/mL ισούται με 2,4 ng IgE.Τα επίπεδα IgE μπορεί να είναι μέχρι και 50Επιπλέον, οι τίτλοι IgE είναι αυξημένοι σε ασθενείς με παρασιτικές ασθένειες.

Το αντιδραστήριο δεν συνιστάται για φυσική εξέταση υγιών ατόμων, με θετικά ή αρνητικά αποτελέσματα των δοκιμών μόνο για τα αντίστοιχα αποτελέσματα των δοκιμών IgE αντισωμάτων,αβεβαιότητα συσχέτιση με τον ασθενή είναι άρρωστος και μπορεί να μην είναι ως ο μόνος δείκτης αξιολόγησης των ασθενών, πρέπει να συνδυάζονται με την κλινική παρουσίαση του ασθενούς και άλλες εργαστηριακές εξετάσεις για ολοκληρωμένη ανάλυση της ασθένειας.

Η μέθοδος ανίχνευσης αυτού του κιτ είναι η ενζυματική ανοσολογική δοκιμή.Μονοκλωνικά αντισώματα που αναγνωρίζουν τα αντι-IgE προφυλακίστηκαν στα πηγάδια της μικροπίνακαςΜετά την επώαση και το πλύσιμο, προστέθηκε διάλυμα υποστρώματος.Διάβασε η τιμή OD και το περιεχόμενό της υπολογίστηκε με αναγνώστη μικροπίνακας.

ΤΡΑΠΟΣ ΤΕΣΤΑΣ

1.Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να αφήνονται να φτάσουν σε θερμοκρασία δωματίου για 15 λεπτά πριν από τη χρήση.

2. Το μπουφέρι πλύσης αραιώνεται με ρυθμό 1: 40 με αποσταγμένο νερό πριν από τη χρήση.

3Το δείγμα πρέπει να αντιστοιχεί στον αριθμό των μικροπίνακων, κάθε πλάκα πρέπει να είναι εφοδιασμένη με πηγάδια αναφοράς (ο αριθμός των πηγών καθορίζεται από την αναφορά και το δείγμα που πρόκειται να δοκιμαστεί).

Σημείωση: Χρησιμοποιήστε ξεχωριστή άκρη πιπετίδας διάθεσης για κάθε δείγμα, κάθε αναφορά ώστε να αποφεύγεται η διασταυρούμενη μόλυνση.

4.Προστίθενται 100μL αραιωτικού δείγματος στο αντίστοιχο πηγάδι, προστίθενται 20μL κάθε δείγμας αναφοράς S0, S1, S2, S3, S4, S5 και δείγμα αντιστοίχως στο αντίστοιχο πηγάδι.

5. Ανακινήστε απαλά για να αναμιχτεί. Καλλιεργήστε σε θερμοκρασία 37°C για 30 λεπτά με την μεμβράνη της πλάκας σφράγισης να σφραγίζει την πλάκα.

6. Στο τέλος της επώασης, αφαιρέστε και πετάξτε το κάλυμμα του πιάτου. Βγάλτε το, προσθέστε μπουφέρ πλύσης σε κάθε πηγάδι για 10 δευτερόλεπτα. Επαναλάβετε 5 φορές. Μετά τον τελευταίο κύκλο πλύσης,στρίψτε την πλάκα σε χαρτί ή καθαρή πετσέτα, και χτυπήστε το για να αφαιρέσετε τα υπολείμματα.

7Προστίθενται αντίστοιχα 100μL Συνοδευτικού υλικού. Καλλιεργείται σε θερμοκρασία 37°C για 30 λεπτά με τη μεμβράνη της πλάκας σφράγισης να σφραγίζει την πλάκα.

8Πλύνε το πιάτο όπως το βήμα 6.

9. Προσθέστε το υποστρώμα Α (50μL) και το υποστρώμα Β (50μL). Ανακινήστε απαλά για να αναμειχθεί. Εμφυτεύστε σε θερμοκρασία 37°C για 10 λεπτά με τη μεμβράνη της πλάκας σφράγισης να σφραγίζει την πλάκα.

10. Προσθέστε 50μL διαλύματος Stop σε κάθε πηγάδι. Ανακατέψτε απαλά κουνώντας, μετρώντας την απορρόφηση εντός 10 λεπτών μετά τη διακοπή της αντίδρασης.Στη συνέχεια, διαβάστε την τιμή απορρόφησης στα 450nm/ 630nm με τον αναγνώστη μικροπίνακωνΥπολογίστε τη συγκέντρωση και αξιολογήστε τα αποτελέσματα.