BIOVANTION αντι εξάρτηση δοκιμής Tg αβ αντι θυρεοσφαιρίνης δοκιμής αντισωμάτων

Θυρεοσφαιρίνη αβ ΕΞΑΡΤΗΣΕΩΝ ΔΟΚΙΜΗΣ αντι-Tg ELISA

1. Προοριζόμενη χρήση

Immunoassay για το τεχνητό ποσοτικό προσδιορισμό των αντισωμάτων στη θυρεοσφαιρίνη στον ανθρώπινο ορό. Ο αντι προσδιορισμός ‐ Tg χρησιμοποιείται ως ενίσχυση στην ανίχνευση των αυτοάνοσων ασθενειών θυροειδή.

2. Περίληψη

Η θυρεοσφαιρίνη (Tg) παράγεται στο θυροειδή αδένα και είναι ένα κύριο συστατικό στη μονάδα λούμεν του θυλακίου θυροειδή. Στη σύμπραξη με συγκεκριμένο peroxidase ενζυμικού θυροειδή ‐ (TPO), Tg έχει μια ουσιαστική λειτουργία στην ιωδίωση tyrosine Λ ‐ και στο σχηματισμό των ορμονών θυροειδή T4 και T3. Και Tg και TPO είναι ενδεχομένως autoantigenic.

Οι ανυψωμένες συγκεντρώσεις ορών των αντισωμάτων ενάντια σε Tg (αυτοαντισώματα Tg ‐) βρίσκονται στα θέματα με autoimmunity βασισμένο στο ‐ thyroiditis. Οι υψηλές συγκεντρώσεις αντι ‐ Tg μαζί με αντι ‐ TPO είναι ενδεικτικές χρόνιο λεμφοκυτταρικό infiltrative thyroiditis ‐ (ασθένεια Hashimoto). Η συχνότητα των αντισωμάτων θυρεοσφαιρίνης είναι περίπου 70 ‐ 80% στα θέματα με αυτοάνοσο thyroiditis ‐, συμπεριλαμβανομένης της ασθένειας Hashimoto, και περίπου 30% στα άτομα με την ασθένεια των τάφων. Η αντι δοκιμή ‐ Tg είναι σημαντική για τη χρήση στον έλεγχο της πορείας thyroiditis Hashimoto και για τη διαφορική διάγνωση (περιπτώσεις πιθανό αυτοάνοσο thyroiditis άγνωστης προέλευσης με τα αρνητικά αντι αποτελέσματα της δοκιμής ‐ TPO, ασθένεια των τάφων χωρίς λεμφοκυτταρική διήθηση, και στην παρέμβαση κανόνα έξω από Tg ‐ τα αυτοαντισώματα στη δοκιμή Tg).

Αν και η ευαισθησία της διαδικασίας μπορεί να αυξηθεί με ταυτόχρονα να καθορίσει τα πρόσθετα αντισώματα θυροειδή (αντι αντισώματα δεκτών ‐ ‐ ‐ TPO, TSH), ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν αποκλείει οριστικά την παρουσία μιας αυτοάνοσης ασθένειας. Το επίπεδο του τίτλου αντισωμάτων δεν συσχετίζει με την κλινική δραστηριότητα της ασθένειας. Οι τίτλοι που είναι ανυψωμένοι αρχικά μπορούν να γίνουν αρνητικοί εάν η ασθένεια εμμένει για μια μακρύτερη χρονική περίοδο ή εάν

η απαλλαγή εμφανίζεται. Εάν τα αντισώματα επανεμφανίζονται μετά από την απαλλαγή, μια υποτροπή είναι πιθανή.

Το ένζυμο σύνδεσε immunosorbent δοκιμών χρήσεων τα ανθρώπινα αντισώματα IgG αντιγόνων και κουνελιών antihuman (αντι-IgG).

3.Reagents υλικά παρεχόμενα

• Ντυμένο Microplate, 8 λουρίδες της X12, 96 φρεάτια. Καλυμμένος προηγουμένως με το ανθρώπινο αντιγόνο TG.

• Διακριβωτές, 6 φιαλίδια, 1 μιλ. κάθε, έτοιμο να χρησιμοποιήσει Συγκεντρώσεις: 0 (Α), 50 (Β), 150 (Γ), 500 (Δ), 1000 (Ε) ΚΑΙ 2000 (Φ) IU/ML.

• Η ενζυμική κλίση, 1 φιαλίδιο, 11,0 μιλ. HRP (peroxidase χρένου) ονόμασε το κουνέλι τα αντι ανθρώπινα αντισώματα IgG (αντι-IgG) στον απομονωτή tris-ΝαCl που περιέχει BSA (λευκωματίνη βοοειδών ορών). Περιέχει 0,1% συντηρητικό ProClin300.

• Diluent ορών: 1 φιαλίδιο, 11mL. Περιορισμός των αλάτων απομονωτών και μιας χρωστικής ουσίας

• Συμπύκνωση λύσης πλυσίματος, 1 φιαλίδιο, 25 μιλ. (40X που συγκεντρώνεται), λύση πλυσίματος PBS-Tween.

• Υπόστρωμα, 1 φιαλίδιο, 11ml, έτοιμο να χρησιμοποιήσει, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Λύση στάσεων, 1 φιαλίδιο, 6,0 μιλ. 1 θειικού οξέος mol/l.

• IFU, 1 αντίγραφο.

• Καπάκι πιάτων: 2 κομμάτια.

4. Υλικά που απαιτούνται (αλλά παρεχόμενος)

• Αναγνώστης Microplate με την απορροφητική ικανότητα μήκους κύματος 450nm και 620nm.
• Πλυντήριο Microplate.
• Επωαστήρας.
• Δονητής πιάτων.
• Micropipettes και πολυδιαυλικά micropipettes που παραδίδουν 50µl με μια ακρίβεια καλύτερα από 1,5%.
• Απορροφητικό έγγραφο.
• Αποσταγμένο νερό

5. Διαδικασία δοκιμής

• Η χρήση μόνο ο αριθμός φρεατίων απαίτησε και σχηματοποιεί τα φρεάτια microplate για κάθε διακριβωτή και δείγμα που δοκιμάζονται.

• Προσθέστε 100 µL των διακριβωτών σε κάθε ένας καλά.

• Προσθέστε 100 µL Diluent δειγμάτων (πράσινο χρώμα) σε κάθε ένα καλά εκτός από τα διακριβωτής-φρεάτια.

• Προσθέστε 10 µL του δείγματος σε κάθε Diluent δειγμάτων καλά (ΣΗΜΕΊΩΣΗ: Τα αντιδραστήρια στα φρεάτια θα γυρίσουν το μπλε χρώμα από πράσινο), κατόπιν κούνημα 30 δευτερόλεπτα.

• Καλύψτε το πιάτο με ένα καπάκι πιάτων και επωάστε σε 37 °C για 30 λεπτά.

• Απορρίψτε το περιεχόμενο του πιάτου μικροϋπολογιστών από τη μετάγγιση ή τη φιλοδοξία. Εάν μεταγγίζοντας, τρυπήστε και λεκιάστε το πιάτο ξηρό με το απορροφητικό έγγραφο.

• Προσθέστε 350 µL της λύσης πλυσίματος, μεταγγίστε (βρύση και λεκές) ή απορροφήστε. Επαναλάβετε 4 πρόσθετες φορές για συνολικά 5 πλυσίματα. Στο τέλος της πλύσης, αναστρέψτε το πιάτο και τρυπήστε έξω οποιαδήποτε υπόλοιπη λύση πλυσίματος επάνω στο απορροφητικό έγγραφο.

• Προσθέστε 100 µL της ενζυμικής κλίσης,

• Καλύψτε το πιάτο με ένα καπάκι πιάτων και επωάστε σε 37 °C για 30 λεπτά

• Προσθέστε 350 µL της λύσης πλυσίματος, μεταγγίστε (βρύση και λεκές) ή απορροφήστε. Επαναλάβετε 4 πρόσθετες φορές για συνολικά 5 πλυσίματα. Στο τέλος της πλύσης, αναστρέψτε το πιάτο και τρυπήστε έξω οποιαδήποτε υπόλοιπη λύση πλυσίματος επάνω στο απορροφητικό έγγραφο.

• Προσθέστε 100 µL του υποστρώματος σε κάθε ένα καλά. Καλύψτε και επωάστε στην περιβαλλοντική θερμοκρασία (18-25℃) στο σκοτάδι για την αντίδραση για 10 λεπτά. Μην τινάξτε το πιάτο μετά από την προσθήκη υποκράτους.

• Προσθέστε 50 µL της λύσης στάσεων σε κάθε μια καλά.

• Κούνημα για 15-20 δευτερόλεπτα για να αναμίξουν το υγρό μέσα στα φρεάτια. Είναι σημαντικό να εξασφαλιστεί ότι το μπλε χρώμα αλλάζει σε κίτρινο εντελώς.

• Διαβάστε την απορροφητικότητα κάθε μια καλά σε 450 NM (που χρησιμοποιούν 620 έως 630 NM ως μήκος κύματος αναφοράς για να ελαχιστοποιήσει καλά τις ατέλειες) σε έναν αναγνώστη πιάτων μικροϋπολογιστών. Τα αποτελέσματα πρέπει να διαβαστούν μέσα σε 30 λεπτά από την προσθήκη της λύσης στάσεων.