Παρακινητική δοκιμή ορμονών θυροειδή ΔΟΚΙΜΉΣ θυρεοτροπίνης TSH ELISA

Καυτή ΕΞΆΡΤΗΣΗ ΔΟΚΙΜΉΣ πώλησης TSH ELISA
REF: Δοκιμές DS177701 96

Προοριζόμενη χρήση
Immunoassay για το τεχνητό ποσοτικό προσδιορισμό της θυρεοτροπίνης στον ανθρώπινο ορό.

1. Περίληψη

• Η θυροειδής-υποκινώντας ορμόνη (TSH, θυρεοτροπίνη) είναι glycoprotein που έχει ένα μοριακό βάρος περ. 30000 daltons και που αποτελείται από δύο υπομονάδες.
• Η μέτρηση της θυρεοτροπίνης συγκέντρωσης ορών πολλάκις (TSH), glycoprotein με ένα μοριακό βάρος 28.000 daltons και εκκριμένος από προηγούμενο το βλεννογόνο, θεωρείται γενικά ως πιό ευαίσθητος δείκτης διαθέσιμος για τη διάγνωση αρχικό και δευτεροβάθμιο (βλεννογόνο) hypothyroidism (1,2).
• Οι μετρήσεις TSH είναι εξίσου χρήσιμες στη διαφοροποίηση δευτεροβάθμιου και τριτογενούς (υποθαλαμικού) hypothyroidism από την αρχική ασθένεια θυροειδή. Η απελευθέρωση TSH από το βλεννογόνο ρυθμίζεται από τη θυρεοτροπίνη απελευθερώνοντας τον παράγοντα (TRH), που εκκρίνεται από τον υποθάλαμο, και από την άμεση δράση T4 και του triiodothyronine (T3), οι ορμόνες θυροειδή, στο βλεννογόνο.
• Τα επίπεδα αύξησης του T3 και του T4 μειώνουν την απάντηση του βλεννογόνου στα διεγερτικά αποτελέσματα TRH. Δευτεροβάθμιο και τριτογενές hypothyroidism, οι συγκεντρώσεις T4 είναι συνήθως χαμηλές και τα επίπεδα TSH είναι γενικά χαμηλά ή κανονικά. Είτε η βλεννογόνος ανεπάρκεια TSH (δευτεροβάθμιο hypothyroidism) είτε η ανεπάρκεια υποκίνησης του βλεννογόνου από TRH (τριτογενές hypothyroidism) προκαλεί αυτό.
• Η δοκιμή υποκίνησης TRH διαφοροποιεί αυτούς τους όρους. Δευτεροβάθμιο hypothyroidism, η απάντηση TSH σε TRH αμβλύνεται ενώ μια κανονική ή καθυστερημένη απάντηση λαμβάνεται τριτογενές hypothyroidism. Περαιτέρω, η εμφάνιση των immunoenzymometric δοκιμών έχει παράσχει στο εργαστήριο την ικανοποιητική ευαισθησία για να επιτρέψει τη διαφοροποίηση hyperthyroidism από το euthyroid πληθυσμό και την επέκταση της χρησιμότητας των μετρήσεων TSH. Αυτή η μέθοδος είναι μια δεύτερης γενεάς δοκιμή, τα οποία παρέχουν τα μέσα για τη διάκριση στη hyperthyroid-euthyroid σειρά. (3)

2. Υλικά αντιδραστηρίων παρεχόμενα
• Ντυμένο Microplate, 8 λουρίδες της X12, 96 φρεάτια, που καλύπτονται προηγουμένως με το ποντίκι μονοκλονικό αντι-TSH.
• Διακριβωτές, 6 φιαλίδια, 1 μιλ. κάθε, έτοιμο να χρησιμοποιήσει Συγκεντρώσεις: 0 (Α), 0,5 (Β), 2 (Γ), 5 (Δ), 10 (Ε) ΚΑΙ 25 ΜIU/ML (Φ).
• Ενζυμική κλίση, 1 φιαλίδιο, 6,0 μιλ. του επονομαζόμενου ποντικιού HRP (peroxidase χρένου) μονοκλονικό αντι-TSH στον απομονωτή tris-ΝαCl που περιέχει BSA (λευκωματίνη βοοειδών ορών). Περιέχει 0,1% συντηρητικό ProClin300.
• Υπόστρωμα, 1 φιαλίδιο, 11ml, έτοιμο να χρησιμοποιήσει, (tetramethylbenzidine) TMB.
• Λύση στάσεων, 1 φιαλίδιο, 6,0 μιλ. 1 θειικού οξέος mol/l.
• Συμπύκνωση λύσης πλυσίματος, 1 φιαλίδιο, 25 μιλ. (40X που συγκεντρώνεται), λύση πλυσίματος PBS-Tween.
• IFU, 1 αντίγραφο.
• Καπάκι πιάτων: 1 κομμάτι.

Υλικά που απαιτούνται (αλλά παρεχόμενος)
• Αναγνώστης Microplate με την απορροφητική ικανότητα μήκους κύματος 450nm και 620nm.
• Πλυντήριο Microplate.
• Επωαστήρας.
• Δονητής πιάτων.
• Micropipettes και πολυδιαυλικά micropipettes που παραδίδουν 50μl με μια ακρίβεια καλύτερα από 1,5%.
• Απορροφητικό έγγραφο.
• Αποσταγμένο νερό

3. Διαδικασία δοκιμής

Εξασφαλίστε τα δείγματα των ασθενών, διακριβωτές, και οι έλεγχοι είναι στην περιβαλλοντική θερμοκρασία (18-25 ℃) πριν από τη μέτρηση. Αναμίξτε όλα τα αντιδραστήρια μέσω ήπια να αναστρέψει πριν από τη χρήση.

• Η χρήση μόνο ο αριθμός φρεατίων απαίτησε και σχηματοποιεί τα φρεάτια των microplates για κάθε διακριβωτή και δείγμα που δοκιμάζονται. • Προσθέστε 25 µL των διακριβωτών ή των δειγμάτων σε κάθε ένα καλά.

• Προσθέστε 100 µL της ενζυμικής κλίσης σε κάθε μια καλά.

• Τινάξτε το microplate ήπια για 30 δευτερόλεπτα που αναμιγνύουν.

• Καλύψτε το πιάτο με ένα καπάκι πιάτων και επωάστε σε 37℃ για 60 λεπτά.

• Απορρίψτε το περιεχόμενο του πιάτου μικροϋπολογιστών από τη μετάγγιση ή τη φιλοδοξία. Εάν μεταγγίζοντας, τρυπήστε και λεκιάστε το πιάτο ξηρό με το απορροφητικό έγγραφο.

• Προσθέστε 350 µL της λύσης πλυσίματος, μεταγγίστε (βρύση και λεκές) ή απορροφήστε. Επαναλάβετε 4 πρόσθετες φορές για συνολικά 5 πλυσίματα. Ένα αυτοματοποιημένο microplate πλυντήριο λουρίδων μπορεί να χρησιμοποιηθεί. Στο τέλος της πλύσης, αναστρέψτε το πιάτο και τρυπήστε έξω οποιαδήποτε υπόλοιπη λύση πλυσίματος επάνω στο απορροφητικό έγγραφο.

• Προσθέστε 100 µL του υποστρώματος σε κάθε ένα καλά.

• Η κάλυψη και επωάζει στην περιβαλλοντική θερμοκρασία (18-25℃) στο σκοτάδι για την αντίδραση για 20 λεπτά. Μην τινάξτε το πιάτο μετά από την προσθήκη υποκράτους.

• Προσθέστε 50 µL της λύσης στάσεων σε κάθε μια καλά.

• Κούνημα για 15-20 δευτερόλεπτα για να αναμίξουν το υγρό μέσα στα φρεάτια. Είναι σημαντικό να εξασφαλιστεί ότι το μπλε χρώμα αλλάζει σε κίτρινο εντελώς.

• Διαβάστε την απορροφητικότητα κάθε μια καλά σε 450 NM (που χρησιμοποιούν 620 έως 630 NM ως μήκος κύματος αναφοράς για να ελαχιστοποιήσει καλά τις ατέλειες) σε έναν αναγνώστη πιάτων μικροϋπολογιστών. Τα αποτελέσματα πρέπει να διαβαστούν μέσα σε 30 λεπτά από την προσθήκη της λύσης στάσεων