Immunoassay εξαρτήσεων της ELISA δοκιμής ebv-VCA IgA αβ ενζυμικό δείγμα πλάσματος δοκιμής

Η εξάρτηση ebv-VCA IgA αβ ELISA καταχωρεί το αριθ.: BE501A
Ενζυμικό immunoassay για την ανίχνευση του αντισώματος IgA στο προερχόμενο από ιό αντιγόνο capsid (VCA) του ιού epstein-Barr (EBV).
 
1. ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΟΚΙΜΗΣ
Η εξάρτηση ebv-VCA IgA αβ ELISA χρησιμοποιεί ένα σύστημα ανίχνευσης όπου microplate τα φρεάτια είναι ντυμένα με το ανασυνδυαζόμενο αντιγόνο που αντιστοιχεί σε ένα ιδιαίτερα αντιγονικό τμήμα ebv-VCA. Τα δείγματα ορών ή πλάσματος, έλεγχοι προστίθενται στα φρεάτια. Κατά τη διάρκεια της επώασης, τα αντισώματα IgA συγκεκριμένα για ebv-VCA παρόν στο δείγμα θα δεσμεύσουν στο ανασυνδυαζόμενο αντιγόνο που καθορίζεται επάνω στα φρεάτια microplate. Τα φρεάτια πλένονται για να αφαιρέσουν τα απεριόριστα υλικά, και η αντι-ανθρώπινη peroxidase IgA κλίση θα δεσμεύσει στο αντιγόνο-αντίσωμα σύνθετο και οι υπερβολικές απεριόριστες ενζυμικές κλίσεις αφαιρούνται πάλι από την πλύση. Το ενζυμικό υπόστρωμα, tetramethylbenzidine (TMB), προστίθεται επάνω στην επώαση που το υπόστρωμα θα υδρολυθεί από το συνδεδεμένο ένζυμο και ένα μπλε ή γαλαζοπράσινο χρώμα αναπτύσσεται στα φρεάτια που περιέχουν τα αντισώματα ebv-VCA IgA. Την ενζυμική αντίδραση από η προσθήκη σταματά του θειικού οξέος. Η ένταση του χρώματος που αναπτύσσεται διαβάζεται spectrophotometrically σε 450nm (450 nm/630 NM) και είναι ανάλογη προς το ποσό αντισωμάτων παρόντων στο δείγμα.
ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ
 
2. Υλικά που παρέχονται τις εξαρτήσεις:

 
3. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΔΟΚΙΜΗΣ

1. Φέρτε την εξάρτηση της ELISA (όλα τα αντιδραστήρια), και τα δείγματα στη θερμοκρασία δωματίου πριν τη χρήση (περίπου 30 λεπτά).
2. Αραιός συγκεντρωμένος απομονωτής 1:19 πλυσίματος με ddH2O. Παραδείγματος χάριν, 5 μιλ. της συμπύκνωσης απομονωτών πλυσίματος πρέπει να αραιωθούν σε έναν συνολικό όγκο 100 μιλ. με εξιοντισμένος ή αποσταγμένο νερό.
3. Για κάθε δοκιμή, θέστε ένα κενό καλά ως έλεγχο υποβάθρου, δύο θετικούς και τρεις αρνητικούς ελέγχους. Διανείμετε το θετικό έλεγχο 100ml και το αρνητικό αντίγραφο ελέγχου στα μεμονωμένα φρεάτια. Ούτε τα δείγματα ούτε η HRP-κλίση δεν πρέπει να προστεθούν στο κενό καλά.
4. Διανέμον 100ml της διάλυσης δειγμάτων στα μεμονωμένα φρεάτια δοκιμής εκτός από τους ελέγχους.
5. Προσθέστε 10ml κάθε δείγματος δοκιμής στα φρεάτια δοκιμής δίνη που αναμιγνύει.
6. Επωάστε για 30 λεπτά σε 37°C
7. Πλύντε κάθε ενός καλά 5 φορές με να γεμίσει κάθε μια καλά με τον αραιωμένο απομονωτή πλυσίματος, κατόπιν να αναστρέψει το πιάτο για να βγεί σθεναρά όλο το νερό και να εμποδίσει το πλαίσιο των φρεατίων σε απορροφητικό χαρτί για λίγα δευτερόλεπτα.
8. Προσθέστε 100ml της ενζυμικής κλίσης σε κάθε μια καλά. Το αναμίξτε ήπια με να στροβιλιστεί το microtiter πιάτο στον επίπεδο πάγκο για τα λεπτά 1. Μην προσθέστε την ενζυμική κλίση στο κενό καλά.
9. Επωάστε για 20 λεπτά σε 37°C
10. Πλύντε το πιάτο 5 φορές ως βήμα 7.
11. Προσθέστε μια πτώση (50ml) της λύσης Α υποστρωμάτων (HRP-υπόστρωμα) σε κάθε μια καλά, κατόπιν προσθέστε μια πτώση (50ml) της λύσης Β υποστρωμάτων (TMB) σε κάθε μια καλά. Αναμίξτε ήπια και επωάστε σε 37°C για 30 λεπτά.
12. Προσθέστε μια πτώση (50ml) της λύσης στάσεων σε κάθε μια για να σταματήσετε καλά την αντίδραση χρώματος. Διαβάστε την αξία OD σε 450 nm/630 NM με το διπλό αναγνώστη πιάτων φίλτρων. Είναι επιλογή να διαβαστεί η αξία OD σε 450 NM με τον ενιαίο αναγνώστη πιάτων φίλτρων. (χρησιμοποιώντας την αξία OD του κενού για να διορθώσει καλά όλη την ανάγνωση OD από όλα τα φρεάτια)