VCAM-1 RUO Elisa Kit Ανθρώπινο αγγειακό ενδοθηλιακό κύτταρο Μοριακό προσκόλλησης 1

Περιγραφή του προϊόντος:

Σκοπός

Το εν λόγω κιτ επιτρέπει τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων VCAM-1 στον ανθρώπινο ορό, στα υπερκαιρετικά κυτταρικών καλλιεργειών και σε άλλα βιολογικά υγρά.

Αρχή της δοκιμής

Το κιτ εξετάζει το επίπεδο του ανθρώπινου VCAM-1 στο δείγμα, χρησιμοποιεί το καθαρισμένο ανθρώπινο αντισώμα VCAM-1 για να καλύψει τα καλάθια της πλάκας μικροτίτρου, κάνει αντισώμα στερεής φάσης, και στη συνέχεια προσθέτει το VCAM-1 στα καλάθια,Συνδυασμένο αντισώμα VCAM- 1 με σήμανση HRP, γίνεται αντισώμα - αντιγόνο - ενζύμιο - αντισώμα σύνθετο, μετά το πλύσιμο πλήρως, προσθέστε TMB υποστρώμα διάλυμα, TMB υποστρώμα γίνεται μπλε χρώμα στο HRP ενζύμι-καταλύεται,Η αντίδραση τερματίζεται με την προσθήκη διαλύματος θειικού οξέος και η αλλαγή χρώματος μετριέται φασματοφωτομετρικά σε μήκος κύματος 450 nmΗ συγκέντρωση του ανθρώπινου VCAM-1 στα δείγματα προσδιορίζεται κατόπιν με τη σύγκριση της υπερβολικής δόσης των δειγμάτων με την τυποποιημένη καμπύλη.

Υλικά που παρέχονται μαζί με το κιτ

Τεχνικές παραμέτρους:

Απαιτήσεις για δείγματα

• Το εpiιχειρησιακό εpiιχειρηατικό piρέpiει να piροβλέpiει την piερίοδο piου piροβλέpiεται για την piαρακολούθηση των εpiιχειρηατικών piροβλήσεων.το δείγμα μπορεί να διατηρείται σε θερμοκρασία -20 °C για τη διατήρηση, Αποφύγετε επαναλαμβανόμενους κύκλους κατάψυξης- τήξης.
• Δεν μπορεί να ανιχνευθεί το δείγμα που περιέχει NaN3, επειδή το NaN3 αναστέλλει το ενεργό HRP.

Διαδικασία αξιολόγησης

• Αραίωση και προσθήκη δείγματος:Αραίωση Αρχική πυκνότητα Πρότυπο όπως ορίζεται στον ακόλουθο πίνακα:

2. Προσθήκη δείγματος: Τοποθετήστε ξεχωριστά τα κενά πηγάδια (τα κενά πηγάδια σύγκρισης δεν προσθέτουν δείγμα και αντιδραστήρα HRP-Conjugate, διαφορετικά κάθε στάδιο λειτουργίας είναι το ίδιο).Προσθέστε 50 μl πρότυπου στο Microelisa stripplate, προσθέστε διάλυμα δείγματος 40μl στο πηγάδι δοκιμής δείγματος, στη συνέχεια προσθέστε δείγμα δοκιμής 10μl (τελικό δείγμα αραίωση είναι 5 φορές), προσθέστε δείγμα στα πηγάδια, μην αγγίξετε το τοίχωμα του πηγάδι όσο το δυνατόν περισσότερο, και προσεκτικά αναμείξτε.

3. Εμφύλιση: Μετά το κλείσιμο της πλάκας με μεμβράνη της πλάκας κλεισίματος, επύλιση για 30 λεπτά σε θερμοκρασία 37°C.

4. Διαμορφώστε υγρό: 30 φορές (ή 20 φορές) διάλυμα πλύσης αραιωμένο 30 φορές (ή 20 φορές) με αποσταγμένο νερό και αποθεματικό.

5. Πλύσιμο: Αποκάλυψη της μεμβράνης της πλάκας κλεισίματος, απόρριψη του υγρού, στεγνώσιμο με κούνημα, προσθήκη του αποθέματος πλύσης σε κάθε πηγάδι, για 30 λεπτά και στη συνέχεια αποστράγγιση, επαναλαμβάνεται 5 φορές, στεγνώσιμο με χτύπημα.

6. Προσθήκη ενζύμου: Προσθήκη αντιδραστήρα HRP-Conjugate 50μl σε κάθε πηγάδι, εκτός από κενό πηγάδι.

7Ενεργοποίηση με 3.

8Πλύσιμο: λειτουργία με 5.

9. Χρώμα: Προσθέστε το διάλυμα χρωμογόνου Α 50ul και το διάλυμα χρωμογόνου Β 50ul σε κάθε πηγάδι, αποφύγετε τη διατήρηση του φωτός για 10 λεπτά στους 37°C

10. Σταματήστε την αντίδραση: Προσθέστε Stop Solution50μl σε κάθε πηγάδι, Σταματήστε την αντίδραση ((το μπλε χρώμα αλλάζει σε κίτρινο χρώμα).

11. Δοκιμασμός: λάβετε κενό πηγάδι ως μηδέν, διαβάζετε την απορρόφηση στα 450nm μετά την προσθήκη του διαλύματος Stop και εντός 15 λεπτών

Υπολογίστε:

Πάρτε την τυπική πυκνότητα ως οριζόντια, την τιμή OD για την κατακόρυφη, σχεδιάστε την τυπική καμπύλη σε χαρτί γραφικών,Βρείτε την αντίστοιχη πυκνότητα σύμφωνα με την τιμή OD δείγματος από την καμπύλη δείγματος, πολλαπλασιαστεί με το πολλαπλάσιο αραίωσης ή υπολογιστεί η ευθεία εξίσωση παλινδρόμησης της τυποποιημένης καμπύλης με την τυποποιημένη πυκνότητα και την τιμή OD, με την τιμή OD του δείγματος στην εξίσωση,υπολογίζεται η πυκνότητα του δείγματος, πολλαπλασιαζόμενο με τον συντελεστή αραίωσης, το αποτέλεσμα είναι η πραγματική πυκνότητα του δείγματος.