Ανθρώπινο Ελεύθερο Ημή RUO ELISA Assay Kit RESEARCH Χρησιμοποιείται μόνο για ιατρική διάγνωση

Σκοπός:

Αυτό το κιτ επιτρέπει τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων ελεύθερου αιμού στο ολικό αίμα.

Αρχή της δοκιμής

Το κιτ εξετάζει το επίπεδο του ανθρώπινου ελεύθερου αιμού στο δείγμα, χρησιμοποιεί καθαρό ανθρώπινο ελεύθερο αντισώμα αιμού για να καλύψει τα καλάθια της πλάκας μικροτίτρου, κάνει αντισώμα στερεής φάσης, και στη συνέχεια προσθέτει ελεύθερο αιμό στα καλάθια,Συνδυασμένο ελεύθερο αντισώμα έμεως με την ετικέτα HRP, γίνεται αντισώμα - αντιγόνο - ενζύμιο - αντισώμα σύνθετο, μετά το πλύσιμο πλήρως, προσθέστε TMB υποστρώμα διάλυμα, TMB υποστρώμα γίνεται μπλε χρώμα στο HRP ενζύμι-καταλύεται,Η αντίδραση τερματίζεται με την προσθήκη διαλύματος θειικού οξέος και η αλλαγή χρώματος μετριέται φασματοφωτομετρικά σε μήκος κύματος 450 nmΗ συγκέντρωση του ανθρώπινου ελεύθερου αιμού στα δείγματα προσδιορίζεται στη συνέχεια συγκρίνοντας την υπερβολική δόση των δειγμάτων με τη τυποποιημένη καμπύλη.

Τεχνικές παραμέτρους:

Υλικά που παρέχονται μαζί με το κιτ:

Απαιτήσεις για δείγματα

• Το εpiιχειρησιακό εpiιχειρηατικό piρέpiει να piροβλέpiει την piερίοδο piου piροβλέpiεται για την piαρακολούθηση των εpiιχειρηατικών piροβλήσεων.το δείγμα μπορεί να διατηρείται σε θερμοκρασία -20 °C για τη διατήρηση, Αποφύγετε επαναλαμβανόμενους κύκλους κατάψυξης- τήξης.
• Δεν μπορεί να ανιχνευθεί το δείγμα που περιέχει NaN3, επειδή το NaN3 αναστέλλει το ενεργό HRP.

Διαδικασία αξιολόγησης

• Αραίωση και προσθήκη δείγματος:Αραίωση Αρχική πυκνότητα Πρότυπο όπως ορίζεται στον ακόλουθο πίνακα:

2.προσθήκη δείγματος:Επιλέξτε ξεχωριστά τα κενά πηγάδια (τα κενά πηγάδια σύγκρισης δεν προσθέτουν δείγμα και αντιδραστήρα HRP-Conjugate, διαφορετικά κάθε στάδιο λειτουργίας είναι το ίδιο).Προσθέστε 50 μl πρότυπου στο Microelisa stripplate, προσθέστε αραιωμένο δείγμα 40μl στο πηγάδι δοκιμής δείγματος, στη συνέχεια προσθέστε δείγμα δοκιμής 10μl (τελική αραιωμένη δείγμα είναι 5 φορές), προσθέστε δείγμα στα πηγάδια, μην αγγίξετε το τοίχωμα του πηγάδι όσο το δυνατόν περισσότερο, και αναμείξτε προσεκτικά.

3.Ενσωματώστε: Μετά το κλείσιμο της πλάκας με μεμβράνη της πλάκας κλεισίματος, ενσωματώστε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία 37°C.

4.Συγκροτείτε υγρό: 30 φορές (ή 20 φορές) διάλυμα πλύσης αραιωμένο 30 φορές (ή 20 φορές) με αποσταγμένο νερό και αποθεματικό.

5.πλύσιμο:Ανοίξτε την μεμβράνη της πλάκας κλεισίματος, απορρίψτε το υγρό, στεγνώστε το με κούνημα, προσθέστε ταμείο πλύσης σε κάθε πηγάδι, μείνετε ακίνητοι για 30 λεπτά και στη συνέχεια αποστραγγίστε, επαναλάβετε 5 φορές, στεγνώστε με χτύπημα.

6.προστίθεται ένζυμος:προστίθενται 50μl αντιδραστήρα HRP-Conjugate σε κάθε πηγάδι, εκτός από το κενό πηγάδι.

7- Ενεργοποίηση με 3.

8- πλύση: λειτουργία με 5.

9.χρώμα:Προστίθεται διάλυμα χρωμογόνου Α 50ul και διάλυμα χρωμογόνου Β 50ul σε κάθε πηγάδι, αποφεύγεται η διατήρηση του φωτός για 10 λεπτά στους 37°C

10.Σταματήστε την αντίδραση: Προσθέστε Stop Solution50μl σε κάθε πηγάδι, Σταματήστε την αντίδραση ((το μπλε χρώμα αλλάζει σε κίτρινο χρώμα).

11. δοκιμή: λαμβάνεται κενό πηγάδι σε μηδέν, διαβάζεται η απορρόφηση στα 450 nm μετά την προσθήκη του διαλύματος Stop και εντός 15 λεπτών.

Υπολογίστε

Πάρτε την τυπική πυκνότητα ως οριζόντια, την τιμή OD για την κατακόρυφη, σχεδιάστε την τυπική καμπύλη σε χαρτί γραφικών,Βρείτε την αντίστοιχη πυκνότητα σύμφωνα με την τιμή OD δείγματος από την καμπύλη δείγματος, πολλαπλασιαστεί με το πολλαπλάσιο αραίωσης ή υπολογιστεί η ευθεία εξίσωση παλινδρόμησης της τυποποιημένης καμπύλης με την τυποποιημένη πυκνότητα και την τιμή OD, με την τιμή OD του δείγματος στην εξίσωση,υπολογίζεται η πυκνότητα του δείγματος, πολλαπλασιαζόμενο με τον συντελεστή αραίωσης, το αποτέλεσμα είναι η πραγματική πυκνότητα του δείγματος.