Κίτ δοκιμής TNF-α Elisa στον άνθρωπο

Σκοπός

Αυτό το κιτ χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων του TNF- α σε ανθρώπινες κυτταρικές καλλιέργειες.

Διαδικασία αξιολόγησης

1- Αραίωση και προσθήκη δείγματος:Αραίωση Αρχική πυκνότητα 400ng/L 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent 200ng/L 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent 100ng/L 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent 50ng/L 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent 25ng/L 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent

2.προσθήκη δείγματος:Διαθέστε ξεχωριστά τα κενά πηγάδια (τα κενά πηγάδια σύγκρισης δεν προσθέτουν δείγμα και αντιδραστήρα HRP-Conjugate, διαφορετικά κάθε στάδιο λειτουργίας είναι το ίδιο).Προσθέστε 50 μl πρότυπου στο Microelisa stripplateΠροσθέστε 40 μl αραιωμένου δείγματος στο δείγμα δοκιμής, στη συνέχεια προσθέστε δείγμα δοκιμής 10 μl (τελική αραιώνονται δείγμα είναι 5 φορές), προσθέστε δείγμα στο δείγμα δοκιμής, μην αγγίξετε το τοίχωμα όσο το δυνατόν περισσότερο, και αναμείξτε απαλά.

3.Ενσωματώστε: Μετά το κλείσιμο της πλάκας με μεμβράνη της πλάκας κλεισίματος, ενσωματώστε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία 37°C.

4.Συγκροτείτε υγρό: 30 φορές (ή 20 φορές) διάλυμα πλύσης αραιωμένο 30 φορές (ή 20 φορές) με αποσταγμένο νερό και αποθεματικό.

5Πλύσιμο:Ανοίξτε την μεμβράνη της πλάκας κλεισίματος, απορρίψτε το υγρό, στεγνώστε το με κούνημα, προσθέστε το μπουφέρι πλύσης σε κάθε πηγάδι, μείνετε για 30 δευτερόλεπτα, στη συνέχεια, αποστραγγίστε, επαναλάβετε 5 φορές, στεγνώστε το με χτύπημα.

6.προστίθεται ένζυμος:Προστίθεται αντιδραστήρας HRP-Conjugate 50μl σε κάθε κύπελλο, εκτός από το κενό κύπελλο.

7- Ενεργοποίηση με 3.

8- πλύση: λειτουργία με 5.

9. χρώμα:Προσθέστε το διάλυμα χρωμογόνου Α 50ul και το διάλυμα χρωμογόνου Β 50ul σε κάθε κύλινδρο, αποφύγετε τη διατήρηση του φωτός για 10 λεπτά στους 37°C

10.Σταματήστε την αντίδραση:Προσθέστε Stop Solution50μl σε κάθε κύλινδρο, Σταματήστε την αντίδραση ((το μπλε χρώμα αλλάζει σε κίτρινο χρώμα).

11Δοκιμή: λαμβάνεται κενό ως μηδέν, διαβάζεται η απορρόφηση σε 450 nm μετά την προσθήκη διαλύματος Stop και εντός 15 λεπτών.

Απαιτήσεις για δείγματα

1. να εξαχθεί το συντομότερο δυνατόν μετά τη συλλογή του δείγματος και σύμφωνα με την σχετική βιβλιογραφία, και να πειραματιστεί το συντομότερο δυνατό μετά την εξαγωγή.1 δείγμα μπορεί να διατηρηθεί σε θερμοκρασία -20 °C για τη διατήρηση, Αποφύγετε επαναλαμβανόμενους κύκλους κατάψυξης- τήξης.

2Δεν μπορεί να ανιχνευθεί το δείγμα που περιέχει NaN3, επειδή το NaN3 αναστέλλει το ενεργό HRP.

Σημαντικές σημειώσεις

1. Το κιτ αφαιρείται από το ψυγείο και πρέπει να ισορροπείται για 15-30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, με τις πλάκες ELISA επικαλυμμένες αν δεν έχει καταναλωθεί μετά το άνοιγμα,η πλάκα πρέπει να φυλάσσεται σε σφραγισμένη σακούλα.

2Το πλύσιμο δεν επηρεάζει το αποτέλεσμα.

3. προσθέστε δείγμα με δειγματοληπτή Κάθε βήμα, και διορθώστε την ακρίβεια του συχνά, αποφεύγοντας το πειραματικό σφάλμα. προσθέστε δείγμα μέσα σε 5 λεπτά, αν ο αριθμός των δειγμάτων είναι πολύ, συνιστούμε να χρησιμοποιήσετε Voley.

4. εάν η περιεκτικότητα του υλικού δοκιμής είναι υπερβολικά υψηλή (Η ΔΔ του δείγματος είναι μεγαλύτερη από το πρώτο πρότυπο βάρος), παρακαλούμε αραιώστε το δείγμα (n φορές), παρακαλούμε αραιώστε και πολλαπλασιάστε τον συντελεστή αραιώσεως.(×n×5).

5Η μεμβράνη της πλάκας κλεισίματος περιορίζει μόνο τη χρήση μιας χρήσης, για να αποφευχθεί η διασταυρούμενη μόλυνση.

6Το υπόστρωμα αποφεύγει τη διατήρηση του φωτός.

7Παρακαλούμε ακολουθήστε αυστηρά τις οδηγίες χρήσης.

8Τα δείγματα, το μπουφέρι πλύσης και κάθε είδος απορριμμάτων θα πρέπει να είναι σύμφωνα με την επεξεργασία του μολυσματικού υλικού.

9Μην αναμιγνύετε αντιδραστήρες με εκείνους από άλλες παρτίδες.