Εφαρμογή της συσκευής ELISA

Ενζυμική ανοσοθεραπεία για την ανίχνευση αντισωμάτων κατά του ιού της ανθρώπινης ηπατίτιδας τύπου C (HCV) RUO

Ο ιός της ηπατίτιδας C (HCV), ο οποίος περιγράφεται προηγουμένως ως η γονιδιακά μεταδιδόμενη μορφή της ηπατίτιδας μη Α, μη Β (NANBH)¹, γίνεται χρόνια ασθένεια στο 50% των περιπτώσεων.²Ο ιός HCV μπορεί επίσης να μεταδοθεί μέσω της ενδοφλέβιας κατάχρησης ναρκωτικών και της οικιακής επαφής.³Ο ιός της ηπατίτιδας C είναι ένας ιός με μονοστεχένιο RNA με ορισμένες δομικές σχέσεις με την οικογένεια των φλαβιϊκών.Οι αλληλουχίες νουκλεϊκών οξέων κλώνων cDNA του HCV παρείχαν τη βάση για την κατασκευή ανασυνδυασμένων πεπτιδίων που αντιπροσωπεύουν υποτιθέμενες πρωτεΐνες του ιού της ηπατίτιδας C.^4,5Διαλογισμός αντισωμάτων του ιού της ηπατίτιδας C στο αίμα με χρήση συνθετικών ή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών,βοήθησε στην αναγνώριση φαινομενικά υγιών δωρητών αίματος με αντισώματα κατά του HCV που διαφορετικά θα μπορούσαν να έχουν μεταδώσει τον ιό.⁶

Πρόκειται για μια ενζυματική ανοσοαπορροφητική δοκιμή που χρησιμοποιεί ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες που προέρχονται από τις βασικές περιοχές του ιού HCV για την ανίχνευση της παρουσίας αντισωμάτων HCV στον ανθρώπινο ορό.

Υλικά που παρέχονται με τα κιτ:

ΕΠΙΚΑΛΗΣΗ ΑΠΟΤΑΣΗΣ

Συνιστάται να αναλύεται κάθε δείγμα και κάθε δείγμα ελέγχου σε διπλό αντίγραφο.

1. Διανέμεται 100 ml ((ή 3 σταγόνες) αραιωτικού δείγματος σε μεμονωμένες δοκιμαστικές πηγάδες.
2. Διανέμεται 100 ml θετικού ελέγχου και αρνητικού ελέγχου σε ξεχωριστά πηγάδια.
3. Προστίθενται 10 ml κάθε δείγματος δοκιμής σε διπλή δοχεία δοκιμής· αναμιγνύεται με δίνη.
4. Εμφύτευση για 30 λεπτά σε θερμοκρασία 37°C
5. Πλύνετε κάθε πηγάδι 5 φορές γεμίζοντας κάθε πηγάδι με αραιωμένο αδιάβροχο πλύσης, στη συνέχεια αντιστρέψτε το πιάτο με δύναμη για να απορροφήσει όλο το νερό και κλείστε το χείλος των πηγών σε απορροφητικό χαρτί για λίγα δευτερόλεπτα.
6. Προσθέστε 100 ml Enzyme Conjugate σε κάθε πηγάδι.Μην προσθέτετε το Enzyme Conjugate στο κενό πηγάδι.
7. Εμφύτευση για 20 λεπτά σε θερμοκρασία 37°C
8. Πλύνετε το πιάτο 5 φορές ως βήμα 5.
9. Προσθέστε μία σταγόνα (50 ml) υποστρώματος διαλύματος Α (HRP-substrate) σε κάθε πηγάδι, στη συνέχεια προσθέστε μία σταγόνα (50 ml) υποστρώματος διαλύματος Β (TMB) σε κάθε πηγάδι. .
10. Προσθέστε μία σταγόνα (50 ml) του διαλύματος Stop σε κάθε πηγάδι για να σταματήσετε την αντίδραση χρώματος.Η ανάγνωση της τιμής OD σε 450 nm είναι προαιρετική με αναγνώστη πλακέτας ενός φίλτρου.. (χρησιμοποιώντας την τιμή OD του κενού πηγάδι για τη διόρθωση όλων των ενδείξεων OD από όλα τα πηγάδια)