Μυοειδής μέθοδος σάντουιτς γάμμα ηντερφερόνης ποντικιών εξαρτήσεων δοκιμής γάμμα RUO Ifn

Ηντερφερόνη γ ποντικιών Γάμμα ηντερφερόνης IFN-Γ IFN-γάμμα IFNG Εξάρτηση της ELISA

Για τον ποσοτικό τεχνητό προσδιορισμό των συγκεντρώσεων ηντερφερόνης γ (IFN-Γ) στον ορό ποντικιών, το πλάσμα, τα μέσα πολιτισμού ή οποιοδήποτε βιολογικό ρευστό.

Αρχή

Αυτή η εξάρτηση της ELISA χρησιμοποιεί την σάντουιτς-Elisa ως μέθοδο. Το Microelisa stripplate που παρέχεται σε αυτήν την εξάρτηση έχει καλυφθεί προηγουμένως με ένα αντίσωμα συγκεκριμένο για IFN-Γ. Τα πρότυπα ή τα δείγματα προστίθενται στα κατάλληλα φρεάτια Microelisa stripplate και συνδυάζονται στο συγκεκριμένο αντίσωμα. Κατόπιν Peroxidase χρένου (HRP) - το κλιμένο αντίσωμα συγκεκριμένο για IFN-Γ προστίθεται σε κάθε Microelisa stripplate καλά και επωάζεται. Τα ελεύθερα συστατικά πλένονται μακριά. Η λύση υποστρωμάτων TMB προστίθεται σε κάθε μια καλά. Μόνο εκείνα τα φρεάτια που περιέχουν IFN-Γ και κλιμένο το HRP αντίσωμα IFN-Γ θα εμφανιστούν μπλε στο χρώμα και θα γίνουν έπειτα κίτρινα μετά από την προσθήκη της λύσης στάσεων. Η οπτική πυκνότητα (OD) μετριέται spectrophotometrically σε ένα μήκος κύματος 450 NM. Η αξία OD είναι ανάλογη προς τη συγκέντρωση IFN-Γ. Μπορείτε να υπολογίσετε τη συγκέντρωση IFN-Γ στα δείγματα με τη σύγκριση του OD των δειγμάτων με την τυποποιημένη καμπύλη.

Υλικά που παρέχονται την εξάρτηση

• Διάλυση των προτύπων

Δέκα φρεάτια τίθενται για τα πρότυπα σε ένα Microelisa stripplate. Σε καλά 1 και καλά 2, η τυποποιημένη λύση 100μl και ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθενται και αναμιγνύονται καλά. Σε καλά 3 και καλά 4, η λύση 100μl από καλά 1 και καλά 2 προστίθεται αντίστοιχα. Κατόπιν ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθεται και αναμιγνύεται καλά. 50μl η λύση απορρίπτεται από καλά 3 και καλά 4. Σε καλά 5 και καλά 6, η λύση 50μl από καλά 3 και καλά 4 προστίθεται αντίστοιχα. Κατόπιν ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθεται και αναμιγνύεται καλά. Σε καλά 7 και καλά 8, η λύση 50μl από καλά 5 και καλά 6 προστίθεται αντίστοιχα. Κατόπιν ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθεται και αναμιγνύεται καλά. Σε καλά 9 και καλά 10, η λύση 50μl από καλά 7 και καλά 8 προστίθεται αντίστοιχα. Κατόπιν ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθεται και αναμιγνύεται καλά. 50μl η λύση απορρίπτεται από καλά 9 και καλά 10. Μετά από τη διάλυση, ο συνολικός όγκος σε όλα τα φρεάτια είναι 50μl και οι συγκεντρώσεις είναι 180 pg/ml, 120pg/ml, 60 pg/ml, 30pg/ml και 15 pg/ml, αντίστοιχα.

Υπολογισμός των αποτελεσμάτων

Οι γνωστές συγκεντρώσεις των προτύπων και της αντίστοιχης ανάγνωσής της OD ποντικιών IFN-Γ σχεδιάζονται στην κλίμακα κούτσουρων (Χ-άξονας) και την κλίμακα κούτσουρων (Υ-άξονας) αντίστοιχα. Η συγκέντρωση του ποντικιού IFN-Γ στο δείγμα καθορίζεται με τη χάραξη του O.D. του δείγματος στον Υ-άξονα. Η αρχική συγκέντρωση υπολογίζεται με τον πολλαπλασιασμό του παράγοντα διαλύσεων.

Ακρίβεια

Ακρίβεια δια--δοκιμής (ακρίβεια μέσα σε μια δοκιμή): 3 δείγματα με το χαμηλό, μέσο και υψηλού επιπέδου ποντίκι IFN-Γ εξετάστηκαν 20 φορές σε ένα πιάτο, αντίστοιχα.

Ακρίβεια διά-δοκιμής (ακρίβεια μεταξύ των δοκιμών): 3 δείγματα με το χαμηλό, μέσο και υψηλού επιπέδου ποντίκι IFN-Γ εξετάστηκαν σε 3 διαφορετικά πιάτα, 8 αντιγραφές σε κάθε πιάτο.

Βιογραφικό σημείωμα (%) = SD/meanX100

Δια--δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<10>

Διά-δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<12>

Σειρά δοκιμής

3pg/ml-200 pg/ml

Ευαισθησία:

0.8pg/ml