Interleukin-2 άλφα εξάρτηση il2-RA ELISA ποντικιών IL2R CD25 υπομονάδων δεκτών

Ποντίκι interleukin-2 υπομονάδα δεκτών άλφα IL2R CD25 Il2-RA εξάρτηση της ELISA

Υλικά που παρέχονται την εξάρτηση

Απαιτήσεις δειγμάτων

• η πήξη ορών στη θερμοκρασία δωματίου 10-20 mins, φυγοκεντρικότητα 20 λ. με την ταχύτητα 2000-3000 r.p.m αφαιρεί το υπερκείμενο νερό, εάν η πτώση εμφανίστηκε, φυγόκεντρος πάλι.
• η πλάσμα-χρήση ταιρίαξε EDTA ή κιτρικού άλατος το πλάσμα δεδομένου ότι ένα αντιπηκτικό, αναμιγνύει 10-20 mins, η φυγοκεντρικότητα 20 λ. με την ταχύτητα 2000-3000 r.p.m αφαιρεί το υπερκείμενο νερό, εάν η πτώση εμφανίστηκε, φυγόκεντρος πάλι.
• Ούρο-συλλέξτε μηνύει ένα αποστειρωμένο εμπορευματοκιβώτιο, η φυγοκεντρικότητα 20 λ. με την ταχύτητα 2000-3000 r.p.m αφαιρεί το υπερκείμενο νερό, εάν η πτώση εμφανίστηκε, φυγόκεντρος πάλι. Η λειτουργία Hydrothorax και της εγκεφαλονωτιαιας ρευστής αναφοράς σε το.
• η κυτταροκαλλιέργεια επιπλέων-ανιχνεύει τα εκκριτικά συστατικά, συλλέγει μηνύει ένα αποστειρωμένο εμπορευματοκιβώτιο, η φυγοκεντρικότητα 20 λ. με την ταχύτητα 2000-3000 r.p.m αφαιρεί το υπερκείμενο νερό, ανιχνεύει τη σύνθεση των κυττάρων, η αναστολή κυττάρων Dilut με PBS (PH7.2-7.4), συγκέντρωση κυττάρων έφθασε σε 1 εκατομμύριο/μιλ., οι επαναλαμβανόμενοι freeze-thaw κύκλοι, τα κύτταρα ζημίας και η απελευθέρωση των ενδοκυτταρικών συστατικών, φυγοκεντρικότητα 20 λ. με την ταχύτητα 2000-3000 r.p.m αφαιρούν το υπερκείμενο νερό, εάν η πτώση εμφανίστηκε, φυγόκεντρος πάλι.
• Τα δείγματα ιστού μετά από τα τέμνοντα δείγματα, ελέγχει το βάρος, προσθέτουν PBS (PH7.2-7.4), που παγώνει γρήγορα με το υγρό άζωτο, διατηρούν τα δείγματα σε 2-8℃ μετά από να λειώσουν, προσθέτουν PBS (PH7.4), που ομογενοποιείται με το χέρι ή οι μύλοι, φυγοκεντρικότητα 20 λ. με την ταχύτητα 2000-3000 r.p.m αφαιρούν το υπερκείμενο νερό.
• το απόσπασμα το συντομότερο δυνατό μετά από τη συλλογή δειγμάτων, και σύμφωνα με τη σχετική λογοτεχνία, και πρέπει να είναι πείραμα το συντομότερο δυνατό μετά από την εξαγωγή. Εάν δεν μπορεί, το δείγμα μπορεί να κρατηθεί σε -20 ℃ για να συντηρήσει, να αποφύγει τους επαναλαμβανόμενους freeze-thaw κύκλους.
• Μην μπορέστε να ανιχνεύσετε το δείγμα που περιέχουν NaN3, επειδή NaN3 εμποδίζει HRP ενεργό.

Αρχή

Αυτή η εξάρτηση της ELISA χρησιμοποιεί την σάντουιτς-Elisa ως μέθοδο. Το Microelisa stripplate που παρέχεται σε αυτήν την εξάρτηση έχει καλυφθεί προηγουμένως με ένα αντίσωμα συγκεκριμένο για IL2R. Τα πρότυπα ή τα δείγματα προστίθενται στα κατάλληλα φρεάτια Microelisa stripplate και συνδυάζονται στο συγκεκριμένο αντίσωμα. Κατόπιν Peroxidase χρένου (HRP) - το κλιμένο αντίσωμα συγκεκριμένο για IL2R προστίθεται σε κάθε Microelisa stripplate καλά και επωάζεται. Τα ελεύθερα συστατικά πλένονται μακριά. Η λύση υποστρωμάτων TMB προστίθεται σε κάθε μια καλά. Μόνο εκείνα τα φρεάτια που περιέχουν IL2R και κλιμένο το HRP αντίσωμα thrombomodulin θα εμφανιστούν μπλε στο χρώμα και θα γίνουν έπειτα κίτρινα μετά από την προσθήκη της λύσης στάσεων. Η οπτική πυκνότητα (OD) μετριέται spectrophotometrically σε ένα μήκος κύματος 450 NM. Η αξία OD είναι ανάλογη προς τη συγκέντρωση IL2R. Μπορείτε να υπολογίσετε τη συγκέντρωση IL2R στα δείγματα με τη σύγκριση του OD των δειγμάτων με την τυποποιημένη καμπύλη.

Σημειώσεις:

• Αποθηκεύστε την εξάρτηση σε 4°C επάνω στην παραλαβή. Η εξάρτηση πρέπει να εξισορροπηθεί στη θερμοκρασία δωματίου πριν από τη δοκιμή. Αφαιρέστε οποιεσδήποτε αχρείαστες λουρίδες από αντίσωμα-ντυμένο το IL2R πιάτο, τις ξανασφραγίστε zip-lock στο φύλλο αλουμινίου και κρατήστε σε 4°C.
• Τα ιζήματα μπορούν να εμφανιστούν στο συγκεντρωμένο πλένοντας απομονωτή. Παρακαλώ θερμάνετε τον απομονωτή για να διαλύσετε όλα τα ιζήματα, τα οποία δεν έχουν επιπτώσεις στα αποτελέσματα.
• Το ακριβές σιφώνιο πρέπει να χρησιμοποιηθεί για να αποφύγει το πειραματικό λάθος. Τα δείγματα πρέπει να προστεθούν στο Microplate σε λιγότερο από 5 λεπτά. Εάν ένας μεγάλος αριθμός δειγμάτων συμπεριλαμβάνεται, το πολλαπλάσιο σιφώνιο καναλιών συστήνεται.
• Η τυποποιημένη καμπύλη πρέπει να περιληφθεί σε κάθε δοκιμή. Τα ξαναδιπλωμένα φρεάτια συστήνονται. Εάν η αξία OD του δείγματος είναι μεγαλύτερη από το πρώτο καλά των προτύπων, παρακαλώ αραιώστε το δείγμα (χρόνοι ν) πριν από τη δοκιμή. Κατά την υπολογισμό της αρχικής συγκέντρωσης thrombomodulin, παρακαλώ πολλαπλασιάστε το συνολικό παράγοντα διαλύσεων (XnX5).
• Προκειμένου να αποφευχθεί η παράλληλη μόλυνση, sealers Microplate πρόκειται για τη one-time χρήση μόνο.
• Παρακαλώ κρατήστε το υπόστρωμα μακρυά από το φως.
• Όλη η λειτουργία πρέπει να είναι συμφωνία με τις οδηγίες του κατασκευαστή αυστηρά. Τα αποτελέσματα που καθορίζονται από το Microtiter αναγνώστη πιάτων.
• Όλοι τα δείγματα, ο πλένοντας απομονωτής και τα απόβλητα πρέπει να επεξεργαστούν ως μολυσματικοί πράκτορες.
• Τα αντιδραστήρια από τα διαφορετικά μέρη δεν πρέπει να αναμιχθούν.