Εξάρτηση 48 δοκιμής αρουραίων E2 RUO εξαρτήσεων Estradiol Elisa ποντικιών φρεάτια και 96 φρεάτια

Αρουραίος Estradiol, εξάρτηση E2 ELISA

Σημειώσεις:

• Η εξαγωγή δειγμάτων και η δοκιμή της ELISA πρέπει να εκτελεσθούν το συντομότερο δυνατό μετά από τη συλλογή δειγμάτων. Τα δείγματα πρέπει να εξαχθούν σύμφωνα με τη σχετική λογοτεχνία. Εάν η δοκιμή της ELISA δεν μπορεί να εκτελεσθεί αμέσως, τα δείγματα μπορούν να αποθηκευτούν σε -20℃.Repeated που οι freeze-thaw κύκλοι πρέπει να αποφευχθούν.
• Οι εξαρτήσεις μας δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τα δείγματα με NaN3 που μπορεί να εμποδίσει τη δραστηριότητα HRP.

Υλικά που παρέχονται την εξάρτηση

Διαδικασία

Διάλυση των προτύπων

τα φρεάτια 1.Ten τίθενται για τα πρότυπα σε ένα Microelisa stripplate. Σε καλά 1 και καλά 2, η τυποποιημένη λύση 100μl και ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθενται και αναμιγνύονται καλά. Σε καλά 3 και καλά 4, η λύση 100μl από καλά 1 και καλά 2 προστίθεται αντίστοιχα. Κατόπιν ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθεται και αναμιγνύεται καλά. 50μl η λύση απορρίπτεται από καλά 3 και καλά 4. Σε καλά 5 και καλά 6, η λύση 50μl από καλά 3 και καλά 4 προστίθεται αντίστοιχα. Κατόπιν ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθεται και αναμιγνύεται καλά. Σε καλά 7 και καλά 8, η λύση 50μl από καλά 5 και καλά 6 προστίθεται αντίστοιχα. Κατόπιν ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθεται και αναμιγνύεται καλά. Σε καλά 9 και καλά 10, η λύση 50μl από καλά 7 και καλά 8 προστίθεται αντίστοιχα. Κατόπιν ο τυποποιημένος απομονωτής διαλύσεων 50μl προστίθεται και αναμιγνύεται καλά. 50μl η λύση απορρίπτεται από καλά 9 και καλά 10. Μετά από τη διάλυση, ο συνολικός όγκος σε όλα τα φρεάτια είναι 50μl και οι συγκεντρώσεις είναι 120 pg/ml, 80 pg/ml, 40 pg/ml, 20 pg/ml και 10pg/ml, αντίστοιχα

2. Στο Microelisa stripplate, αφήστε καλά έναν κενό ως κενό έλεγχο. Στα φρεάτια δειγμάτων, ο απομονωτής διαλύσεων δειγμάτων 40μl και το δείγμα 10μl προστίθενται (ο παράγοντας διαλύσεων είναι 5). Τα δείγματα πρέπει να φορτωθούν επάνω στο κατώτατο σημείο χωρίς να αγγίξουν τον τοίχο φρεατίων. Μίγμα καλά με το ευγενές τίναγμα.

3. Επώαση: επωάστε 30 λ. σε 37℃ μετά από σφραγισμένος με τη μεμβράνη πιάτων περάτωσης.

4. Διάλυση: αραιώστε το συγκεντρωμένο πλένοντας απομονωτή με το αποσταγμένο νερό (30 φορές για 96T και 20 φορές για 48T).

5. Πλύσιμο: προσεκτικά η φλούδα από τη μεμβράνη πιάτων περάτωσης, απορροφά και ξαναγέμισμα με τη λύση πλυσίματος. Απορρίψτε τη λύση πλυσίματος μετά από να στηριχτεί για 30 δευτερόλεπτα. Επαναλάβετε τη διαδικασία πλύσης για 5 φορές.

6. Προσθέστε το HRP-συζευγμένο αντιδραστήριο 50 μl σε κάθε ένα καλά εκτός από τον κενό έλεγχο καλά.

7. Επώαση όπως περιγράφεται στο βήμα 3.

8. Πλύσιμο όπως περιγράφεται στο βήμα 5.

9. Χρωματισμός: Προσθέστε Chromogen 50 μl τη λύση Α και Chromogen 50 μl τη λύση Β σε κάθε ένα καλά, αναμίξτε με ήπια να τινάξει και επωάστε σε 37℃ για 15 λεπτά. Παρακαλώ αποφύγετε το φως κατά τη διάρκεια του χρωματισμού.

10. Λήξη: προσθέστε τη λύση στάσεων 50 μl σε κάθε μια για να ολοκληρώσετε καλά την αντίδραση. Το χρώμα πρέπει καλά να αλλάξει από μπλε σε κίτρινο.

11. Διαβάστε την απορροφητικότητα O.D. σε 450nm χρησιμοποιώντας έναν Microtiter αναγνώστη πιάτων. Η αξία OD του κενού ελέγχου καλά τίθεται ως μηδέν. Η δοκιμή πρέπει να πραγματοποιηθεί μέσα σε 15 λεπτά μετά από να προσθέσει τη λύση στάσεων.

Ακρίβεια

Ακρίβεια δια--δοκιμής (ακρίβεια μέσα σε μια δοκιμή): 3 δείγματα με χαμηλό, μέσο και υψηλού επιπέδου E2 εξετάστηκαν 20 φορές σε ένα πιάτο, αντίστοιχα.

Ακρίβεια διά-δοκιμής (ακρίβεια μεταξύ των δοκιμών): 3 δείγματα με χαμηλό, μέσο και υψηλού επιπέδου E2 εξετάστηκαν σε 3 διαφορετικά πιάτα, 8 αντιγραφές σε κάθε πιάτο.

Βιογραφικό σημείωμα (%) = SD/meanX100

Δια--δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<10>

Διά-δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<12>

Σειρά δοκιμής

1.8 pg/ml -150 pg/ml