Ανθρώπινη εξάρτηση Thrombomodulin TM Fetomodulin CD141 THBD THRM ELISA

Ανθρώπινο thrombomodulin, TM, Fetomodulin, CD141, THBD, εξάρτηση THRM ELISA για την ερευνητική χρήση

Ανθρώπινο thrombomodulin, TM, Fetomodulin, CD141, THBD, εξάρτηση THRM ELISA

Υλικά που παρέχονται την εξάρτηση

Αρχή

Αυτή η εξάρτηση της ELISA χρησιμοποιεί την σάντουιτς-Elisa ως μέθοδο. Το Microelisa stripplate που παρέχεται σε αυτήν την εξάρτηση έχει καλυφθεί προηγουμένως με ένα αντίσωμα συγκεκριμένο για το thrombomodulin. Τα πρότυπα ή τα δείγματα προστίθενται στα κατάλληλα φρεάτια Microelisa stripplate και συνδυάζονται στο συγκεκριμένο αντίσωμα. Κατόπιν Peroxidase χρένου (HRP) - το κλιμένο αντίσωμα συγκεκριμένο για το thrombomodulin προστίθεται σε κάθε Microelisa stripplate καλά και επωάζεται. Τα ελεύθερα συστατικά πλένονται μακριά. Η λύση υποστρωμάτων TMB προστίθεται σε κάθε μια καλά. Μόνο εκείνα τα φρεάτια που περιέχουν το thrombomodulin και κλιμένο το HRP αντίσωμα thrombomodulin θα εμφανιστούν μπλε στο χρώμα και θα γίνουν έπειτα κίτρινα μετά από την προσθήκη της λύσης στάσεων. Η οπτική πυκνότητα (OD) μετριέται spectrophotometrically σε ένα μήκος κύματος 450 NM. Η αξία OD είναι ανάλογη προς τη συγκέντρωση του thrombomodulin. Μπορείτε να υπολογίσετε τη συγκέντρωση του thrombomodulin στα δείγματα με τη σύγκριση του OD των δειγμάτων με την τυποποιημένη καμπύλη.

Προετοιμασία δειγμάτων

1. Προετοιμασία ορών

Μετά από τη συλλογή ολόκληρου του αίματος, επιτρέψτε στο αίμα για να σβολιάσετε με την αναχώρηση του ανενόχλητου στη θερμοκρασία δωματίου. Αυτό διαρκεί συνήθως 10-20 λεπτά. Αφαιρέστε το θρόμβο με τη φυγοκέντρωση σε 2,000-3,000 περιστροφή/λεπτό για 20 λεπτά. Εάν τα ιζήματα εμφανίζονται κατά τη διάρκεια της επιφύλαξης, το δείγμα πρέπει να είναι πάλι.

2. Προετοιμασία πλάσματος

Συλλέξτε ολόκληρο το αίμα στους σωλήνες με το αντιπηκτικό (EDTA ή κιτρικό άλας). Μετά από επωασμένος στη θερμοκρασία δωματίου για 10-20 λεπτά, οι σωλήνες είναι για 20 λ. σε 2,000-3,000 περιστροφή/λεπτό. Συλλέξτε το υπερκείμενο νερό προσεκτικά ως δείγματα πλάσματος. Εάν τα ιζήματα εμφανίζονται κατά τη διάρκεια της επιφύλαξης, το δείγμα πρέπει να είναι πάλι.

3. Δείγματα ούρων

Συλλέξτε τα ούρα στους αποστηρωμένους σωλήνες. Συλλέξτε το υπερκείμενο νερό προσεκτικά μετά από να υποβάλει σε φυγοκέντρωση για 20 λ. σε 2,000-3,000 περιστροφή/λεπτό. Εάν τα ιζήματα εμφανίζονται κατά τη διάρκεια της επιφύλαξης, το δείγμα πρέπει να είναι πάλι. Η διαδικασία προετοιμασιών του εγκεφαλονωτιαίυ ρευστού και pleuroperitoneal ρευστού είναι η ίδια με αυτήν του δείγματος ούρων.

4. Δείγματα κυττάρων

Εάν θέλετε να ανιχνεύσετε τις εκκρίσεις των κυττάρων, συλλέξτε το υπερκείμενο νερό πολιτισμού στους αποστηρωμένους σωλήνες. Συλλέξτε το υπερκείμενο νερό προσεκτικά μετά από να υποβάλει σε φυγοκέντρωση για 20 λ. σε 2,000-3,000 περιστροφή/λεπτό. Εάν θέλετε να ανιχνεύσετε τα ενδοκυτταρικά συστατικά, αραιώστε τα κύτταρα σε 1X106/ml με PBS (pH 7.2-7.4). Τα κύτταρα καταστράφηκαν για να απελευθερώσουν τα ενδοκυτταρικά συστατικά με το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω. Συλλέξτε το υπερκείμενο νερό προσεκτικά μετά από να υποβάλει σε φυγοκέντρωση για 20 λ. σε 2,000-3,000 περιστροφή/λεπτό. Εάν τα ιζήματα εμφανίζονται κατά τη διάρκεια της επιφύλαξης, το δείγμα πρέπει να είναι πάλι.

5. Δείγματα ιστού

Τα δείγματα ιστού κόβονται, ζυγίζονται, παγώνουν στο υγρό άζωτο και αποθηκεύονται σε -80℃ για τη μελλοντική χρήση. Τα δείγματα ιστού ομογενοποιήθηκαν μετά από να προσθέσουν PBS (pH 7,4). Τα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιηθούν σε 4℃. Συλλέξτε το υπερκείμενο νερό προσεκτικά μετά από να υποβάλει σε φυγοκέντρωση για 20 λ. σε 2,000-3,000 περιστροφή/λεπτό. Υποπολλαπλάσιο το υπερκείμενο νερό για τη δοκιμή της ELISA και τη μελλοντική χρήση.

Σημειώσεις:

• Η εξαγωγή δειγμάτων και η δοκιμή της ELISA πρέπει να εκτελεσθούν το συντομότερο δυνατό μετά από τη συλλογή δειγμάτων. Τα δείγματα πρέπει να εξαχθούν σύμφωνα με τη σχετική λογοτεχνία. Εάν η δοκιμή της ELISA δεν μπορεί να εκτελεσθεί αμέσως, τα δείγματα μπορούν να αποθηκευτούν σε -20℃.Repeated που οι freeze-thaw κύκλοι πρέπει να αποφευχθούν.
• Οι εξαρτήσεις μας δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τα δείγματα με NaN3 που μπορεί να εμποδίσει τη δραστηριότητα HRP.