Ανθρώπινη αντι εξάρτηση δοκιμής HIV 1&2 Elisa τον ιό για ανθρώπινης ανεπάρκειας αντισωμάτων

3. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΔΟΚΙΜΗΣ

• Επιτρέψτε σε όλα τα συστατικά για να φθάσετε στη θερμοκρασία δωματίου πριν τη χρήση. Αραιώστε το συγκεντρωμένο απομονωτή 1:20 πλυσίματος με ddH2O.
• Σύνολο δύο θετικοί και τρεις αρνητικοί έλεγχοι. Διανέμον 100μl του θετικού ελέγχου (HIV-1 και HIV-2) καθώς επίσης και του αρνητικού ελέγχου εις διπλούν στα αντίστοιχα φρεάτια χωρίς diluent δειγμάτων. Σύνολο ένα κενό καλά ως έλεγχο υποβάθρου χωρίς προσθήκη οποιουδήποτε υγρού. Προσθέστε 50μl diluent δειγμάτων σε κάθε δοκιμή καλά, προσθέστε τον ορό ή το πλάσμα δοκιμής 50 μl στο μίγμα φρεατίων δοκιμής λεπτομερώς.
• Τοποθετήστε το microtiter πιάτο σε ένα υγραμένο πεδίο και επωάστε σε 37°C για 30 λεπτά.
• Απορρίψτε τη λύση αντίδρασης και προσθέστε αραιωμένο το 350μl απομονωτή πλυσίματος σε κάθε ένας καλά. Απορρίψτε τον απομονωτή πλυσίματος μετά από να ενυδατώσει για 15-30seconds. Επαναλάβετε τη διαδικασία πλύσης 5 φορές και έπειτα αναστροφή του πιάτου για να βγεί σθεναρά όλο το νερό και εμποδίζοντας το πλαίσιο των φρεατίων σε απορροφητικό χαρτί για λίγα δευτερόλεπτα.
• Προσθέστε 100μl της ενζυμικής κλίσης σε κάθε μια καλά. Το αναμίξτε ήπια με να στροβιλιστεί το microtiter πιάτο στον επίπεδο πάγκο για 1 λεπτό. Μην προσθέστε την ενζυμική κλίση στο κενό καλά.
• Τοποθετήστε το microtiter πιάτο σε ένα υγραμένο πεδίο και επωάστε σε 37°C για 30 λεπτά.
• Πλύντε κάθε ενός καλά 5 φορές με να γεμίσει κάθε μια καλά με τον αραιωμένο απομονωτή πλυσίματος 1X, κατόπιν να αναστρέψει το πιάτο για να βγεί σθεναρά όλο το νερό και να εμποδίσει το πλαίσιο των φρεατίων σε απορροφητικό χαρτί για λίγα δευτερόλεπτα.
• Προσθέστε 50μl της λύσης Α υποστρωμάτων (υπόστρωμα HRP) σε κάθε ένα καλά, κατόπιν προσθέστε 50μl της λύσης Β υποστρωμάτων (TMB) σε κάθε ένα καλά. Αναμίξτε ήπια και επωάστε σε 37°C for15 λεπτό.
• Προσθέστε μια πτώση (50μl) της λύσης στάσεων σε κάθε μια για να σταματήσετε καλά την αντίδραση χρώματος.
• Διαβάστε την αξία OD σε 450 nm/630 NM με το διπλό αναγνώστη πιάτων φίλτρων. Είναι επιλογή να διαβαστεί η αξία OD σε 450 NM με τον ενιαίο αναγνώστη πιάτων φίλτρων. (χρησιμοποιώντας την αξία OD του κενού για να διορθώσει καλά όλη την ανάγνωση OD από όλα τα φρεάτια