Ονομασία του προϊόντος

Εντολή ανίχνευσης RT-PCR σε πραγματικό χρόνο για τον ιό της ηπατίτιδας D (HDV)

Σκοπός χρήσης

Για τηνin vitro ποιοτική ανίχνευση του HDV RNAσε ανθρώπινο ορό ή πλάσμαδιάγνωση, παρακολούθηση και ποσοτικοποίηση του ιικού φορτίου∆ιαφορά μεταξύ των ασθενών με λοίμωξη από τον ιό ηπατίτιδας D και των ασθενών με λοίμωξη από τον ιό ηπατίτιδας D.

Τεχνικές παραμέτρους:

Αρχή της δοκιμής

• RT-PCR σε πραγματικό χρόνο: στοχεύει σε μια προστατευόμενη περιοχή τηςΓενολόγιο HDV(π.χ.R0ήHDAg(βλ.Προετοιμαστικές για ειδικές ακολουθίες και ανιχνευτές TaqMan(π.χ. με σήμα FAM).

• Υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα: Δεν υπάρχει διασταυρούμενη αντιδραστικότητα με τον ιό HBV, HCV ή άλλους ιούς ηπατίτιδας.

• Εσωτερικός έλεγχος (IC): Περιλαμβάνεται για την παρακολούθηση της εκχύλισης RNA και της αναστολής της PCR (π.χ. RNase P ή έλεγχος συνθετικού RNA).

Συστατικά του κιτ

1. RT-PCR Master Mix (Κύριο μείγμα RT-PCR)Περιέχει:Αντίστροφη μεταγραφάση, πολυμεράση Taq θερμής εκκίνησης, dNTPs και βελτιστοποιημένο απόσβεση.

2. Μείγμα πρώτης βάσης/ζώνης: Ολιγονουκλεοτίδια ειδικά για τον HDV με φθοριούχο ανιχνευτή (π.χ. FAM για τον HDV, HEX/VIC για τον IC).

3. Ελέγχου:

   • Θετικός έλεγχος: Συνθετικό RNA HDV ή αδρανοποιημένος ιός.

   • Αρνητικός έλεγχος: Νερό χωρίς νουκλεάσες.

   • Εσωτερικός έλεγχος(εάν περιλαμβάνεται).

4. Άλλα αντιδραστήρια: DNase/RNase-free νερό, σωλήνες αντίδρασης (εάν παρέχονται).

Η ροή εργασίας

1. Προετοιμασία δείγματος: Εξόρυξη ιικού RNA (συμβατό μεQIAamp, MagMAX ή αυτοματοποιημένα συστήματα)).

2. Εγκατάσταση PCR: Αναμειγνύεται το εκχυλισμένο RNA με το κύριο μείγμα και τα primers/ζόντες.

3. Αύξηση:

   • Αντίστροφη μεταγραφή50°C για 10-15 λεπτά.

   • Ενεργοποίηση PCR95°C για 2,5 λεπτά.

   • Ποδηλασία: 40·45 κύκλοι 95°C (10 δευτερόλεπτα) → 60°C (30·60 δευτερόλεπτα, ανάγνωση φθορισμού).

4. Ανάλυση:

   • Ποσοτική: Τυποποιημένη καμπύλη για το ιικό φορτίο (IU/mL ή αντίγραφα/mL).

   • Ποιοτικό: Κωριακή τιμή Ct για θετικά/αρνητικά αποτελέσματα.

Χαρακτηριστικά επιδόσεων

• Αισθησία:≤ 10·50 IU/ml(95% LOD).

• Γραμμικό εύρος:102· 108 IU/ ml(ποσοτικά κιτ).

• Ειδικότητα: Δεν υπάρχει διασταυρούμενη αντίδραση με τον ιό HBV, τον ιό HCV, τον ιό HIV ή άλλους κοινούς παθογόνους παράγοντες.

• Ακριβότητα: CV < 5% για τη διακύμανση εντός και μεταξύ των δοκιμών.

•