Άλφα εξάρτηση της Elisa παράγοντα νέκρωσης όγκων αρουραίων για άλφα 48 φρεάτια Tnf

Παράγοντας α, Cachectin, TNF, TNFSF2, ΕΞΆΡΤΗΣΗ νέκρωσης όγκων αρουραίων TNF-Α ELISA

Υλικά που παρέχονται την εξάρτηση

Αρχή

Αυτή η εξάρτηση της ELISA χρησιμοποιεί την σάντουιτς-Elisa ως μέθοδο. Το Microelisa stripplate που παρέχεται σε αυτήν την εξάρτηση έχει καλυφθεί προηγουμένως με ένα αντίσωμα συγκεκριμένο για TNF-Α. Τα πρότυπα ή τα δείγματα προστίθενται στα κατάλληλα φρεάτια Microelisa stripplate και συνδυάζονται στο συγκεκριμένο αντίσωμα. Κατόπιν Peroxidase χρένου (HRP) - το κλιμένο αντίσωμα συγκεκριμένο για TNF-Α προστίθεται σε κάθε Microelisa stripplate καλά και επωάζεται. Τα ελεύθερα συστατικά πλένονται μακριά. Η λύση υποστρωμάτων TMB προστίθεται σε κάθε μια καλά. Μόνο εκείνα τα φρεάτια που περιέχουν TNF-Α και κλιμένο το HRP αντίσωμα thrombomodulin θα εμφανιστούν μπλε στο χρώμα και θα γίνουν έπειτα κίτρινα μετά από την προσθήκη της λύσης στάσεων. Η οπτική πυκνότητα (OD) μετριέται spectrophotometrically σε ένα μήκος κύματος 450 NM. Η αξία OD είναι ανάλογη προς τη συγκέντρωση TNF-Α. Μπορείτε να υπολογίσετε τη συγκέντρωση TNF-Α στα δείγματα με τη σύγκριση του OD των δειγμάτων με την τυποποιημένη καμπύλη.

Σημειώσεις:

• Αποθηκεύστε την εξάρτηση σε 4°C επάνω στην παραλαβή. Η εξάρτηση πρέπει να εξισορροπηθεί στη θερμοκρασία δωματίου πριν από τη δοκιμή. Αφαιρέστε οποιεσδήποτε αχρείαστες λουρίδες από αντίσωμα-ντυμένο το TNF-Α πιάτο, τις ξανασφραγίστε zip-lock στο φύλλο αλουμινίου και κρατήστε σε 4°C.
• Τα ιζήματα μπορούν να εμφανιστούν στο συγκεντρωμένο πλένοντας απομονωτή. Παρακαλώ θερμάνετε τον απομονωτή για να διαλύσετε όλα τα ιζήματα, τα οποία δεν έχουν επιπτώσεις στα αποτελέσματα.
• Το ακριβές σιφώνιο πρέπει να χρησιμοποιηθεί για να αποφύγει το πειραματικό λάθος. Τα δείγματα πρέπει να προστεθούν στο Microplate σε λιγότερο από 5 λεπτά. Εάν ένας μεγάλος αριθμός δειγμάτων συμπεριλαμβάνεται, το πολλαπλάσιο σιφώνιο καναλιών συστήνεται.
• Η τυποποιημένη καμπύλη πρέπει να περιληφθεί σε κάθε δοκιμή. Τα ξαναδιπλωμένα φρεάτια συστήνονται. Εάν η αξία OD του δείγματος είναι μεγαλύτερη από το πρώτο καλά των προτύπων, παρακαλώ αραιώστε το δείγμα (χρόνοι ν) πριν από τη δοκιμή. Κατά την υπολογισμό της αρχικής συγκέντρωσης thrombomodulin, παρακαλώ πολλαπλασιάστε το συνολικό παράγοντα διαλύσεων (XnX5).
• Προκειμένου να αποφευχθεί η παράλληλη μόλυνση, sealers Microplate πρόκειται για τη one-time χρήση μόνο.
• Παρακαλώ κρατήστε το υπόστρωμα μακρυά από το φως.
• Όλη η λειτουργία πρέπει να είναι συμφωνία με τις οδηγίες του κατασκευαστή αυστηρά. Τα αποτελέσματα που καθορίζονται από το Microtiter αναγνώστη πιάτων.
• Όλοι τα δείγματα, ο πλένοντας απομονωτής και τα απόβλητα πρέπει να επεξεργαστούν ως μολυσματικοί πράκτορες.
• Τα αντιδραστήρια από τα διαφορετικά μέρη δεν πρέπει να αναμιχθούν.

Οι γνωστές συγκεντρώσεις TNF-προτύπων και της αντίστοιχης ανάγνωσής της OD σχεδιάζονται στην κλίμακα κούτσουρων (Χ-άξονας) και την κλίμακα κούτσουρων (Υ-άξονας) αντίστοιχα. Η συγκέντρωση του TNF-α στο δείγμα καθορίζεται με τη χάραξη του O.D. του δείγματος στον Υ-άξονα. Η αρχική συγκέντρωση υπολογίζεται με τον πολλαπλασιασμό του παράγοντα διαλύσεων.