Τυποποιητικό Ελίζα για τον παράγοντα ογκολογικής νέκρωσης αρουραίων

Όγκος Νέκρωσης Όγκου α; Cachectin, TNF, TNFSF2, TNF-α ELISA KIT

Rat Tumor Necrosis Factor Alpha Elisa Kit For Tnf Alpha 48 Wells

Υλικά που παρέχονται με το κιτ

Αρχή

Αυτό το κιτ ELISA χρησιμοποιεί Sandwich-ELISA ως μέθοδο. Η Microelisa stripplate που παρέχεται σε αυτό το κιτ έχει προ-επικαλυφθεί με ένα αντίσωμα ειδικό για TNF-α . Πρότυπα ή δείγματα προστίθενται στις κατάλληλες φρεάτια Microelisa stripplate και συνδυάζονται με το ειδικό αντίσωμα. Στη συνέχεια, ένα αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση χρένου (HRP) ειδικό για TNF-α προστίθεται σε κάθε φρεάτιο Microelisa stripplate και επωάζεται. Τα ελεύθερα συστατικά ξεπλένονται. Το διάλυμα υποστρώματος TMB προστίθεται σε κάθε φρεάτιο. Μόνο εκείνα τα φρεάτια που περιέχουν TNF-α και το συζευγμένο αντίσωμα θρομβομοντουλίνης HRP θα εμφανιστούν μπλε χρώμα και στη συνέχεια θα γίνουν κίτρινα μετά την προσθήκη του διαλύματος διακοπής. Η οπτική πυκνότητα (OD) μετράται φασματοφωτομετρικά σε μήκος κύματος 450 nm. Η τιμή OD είναι ανάλογη της συγκέντρωσης του TNF-α. Μπορείτε να υπολογίσετε τη συγκέντρωση του TNF-α στα δείγματα συγκρίνοντας το OD των δειγμάτων με την τυπική καμπύλη.

Σημειώσεις:

• Αποθηκεύστε το κιτ στους 4°C κατά την παραλαβή. Το κιτ θα πρέπει να εξισορροπηθεί σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη δοκιμασία. Αφαιρέστε τυχόν περιττές ταινίες από την πλάκα επικαλυμμένης με αντίσωμα TNF-α, σφραγίστε τις ξανά σε φύλλο με φερμουάρ και φυλάξτε τις στους 4°C.
• Ενδέχεται να εμφανιστούν κατακρημνίσματα σε συμπυκνωμένο ρυθμιστικό πλύσης. Παρακαλούμε θερμάνετε το ρυθμιστικό διάλυμα για να διαλύσετε όλα τα κατακρημνίσματα, τα οποία δεν θα επηρεάσουν τα αποτελέσματα.
• Θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί ακριβής πιπέτα για την αποφυγή πειραματικών σφαλμάτων. Τα δείγματα θα πρέπει να προστεθούν στη Microplate σε λιγότερο από 5 λεπτά. Εάν περιλαμβάνεται μεγάλος αριθμός δειγμάτων, συνιστάται η πιπέτα πολλαπλών καναλιών.
• Η τυπική καμπύλη θα πρέπει να περιλαμβάνεται σε κάθε δοκιμασία. Συνιστώνται επαναλαμβανόμενα φρεάτια. Εάν η τιμή OD του δείγματος είναι μεγαλύτερη από το πρώτο φρεάτιο των προτύπων, παρακαλούμε αραιώστε το δείγμα (n φορές) πριν από τη δοκιμή. Κατά τον υπολογισμό της αρχικής συγκέντρωσης θρομβομοντουλίνης, παρακαλούμε πολλαπλασιάστε τον συνολικό συντελεστή αραίωσης (XnX5).
• Για να αποφευχθεί η διασταυρούμενη μόλυνση, οι σφραγιστές Microplate είναι μόνο για μία χρήση.
• Παρακαλούμε κρατήστε το υπόστρωμα μακριά από το φως.
• Όλη η λειτουργία θα πρέπει να είναι σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή αυστηρά. Τα αποτελέσματα που καθορίζονται από το Microtiter Plate Reader.
• Όλα τα δείγματα, το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης και τα απόβλητα θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικοί παράγοντες.
• Τα αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες δεν πρέπει να αναμιγνύονται.

Γνωστές συγκεντρώσεις του προτύπου TNF-a και η αντίστοιχη ανάγνωση OD σχεδιάζονται στην κλίμακα log (άξονας x) και στην κλίμακα log (άξονας y) αντίστοιχα. Η συγκέντρωση του TNF-a στο δείγμα προσδιορίζεται σχεδιάζοντας το O.D. του δείγματος στον άξονα Υ. Η αρχική συγκέντρωση υπολογίζεται πολλαπλασιάζοντας τον συντελεστή αραίωσης.